Pāriet uz saturu
WI 38 VA13 subline 2RA
Audums
Plaušas
Sinonīmi
WI 38 VA-13 subline 2RA, WI 38VA13 subline 2RA, WI-38 VA13 sub 2 RA, WI38-VA13 subline 2RA, WI38 VA13/2RA, WI38VA13/2RA, VA13 2RA, WI-38 VA13, WI 38 VA 13, WI38-VA13, WI38/VA13, WI38VA13, VA-13, VA13, AG07217, AG7217

Dokumenti

WI 38 VA13 subline 2RA

Cell line · Preces numurs 300421

The WI-38 VA13 subline 2RA, derived from the historic WI-38 cell line originally sourced from the lung tissue of a 3-month-old fetus, represents a key adv...

€430.00bez nodokļa un piegādes izmaksām

Pielāgošana / Ieteikumi

Noliktavā
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
  • CoA
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

WI-38 VA13 apakšlīnija 2RA, kas iegūta no vēsturiskās WI-38 šūnu līnijas, kura sākotnēji tika iegūta no 3 mēnešus veca augļa plaušu audiem, ir būtisks sasniegums šūnu kultūru tehnoloģijas jomā. Sākotnējā WI-38 šūnu līnija bija ļoti svarīga, izstrādājot vakcīnas pret daudzām vīrusu slimībām, piemēram, masalām, cūciņām, masaliņām un A hepatītu. VA13 apakšlīnija 2RA ir šīs šūnu līnijas nemortalizēts variants, kas iegūts, transformējot ar Simija vīrusu 40 (SV40), kas ir ierasta prakse nemirstīgu šūnu līniju izstrādē, kas ļauj neierobežoti ilgi replicēt šūnas, pārsniedzot standarta novecošanas punktu, kas ir aptuveni 50 populācijas dubultojumi.

SV40 inkorporēšana WI-38 šūnās, lai izveidotu VA13 apakšlīniju 2RA, pagarina šūnu dzīves ilgumu, nodrošinot ilglaicīgāku modeli ilgtermiņa eksperimentiem. Šī transformācija saglabā sākotnējo diploīdo šūnu pamatīpašības, bet izmaina to dzīves ciklu un augšanas modeļus, nodrošinot ilgstošu augšanu un atvieglojot plašus pētījumus, kas nebija iespējami, izmantojot vecākās šūnu līnijas ierobežoto dzīves ilgumu. Tāpēc VA13 apakšlīnija ir īpaši noderīga ilgstošos un plašos pētījumos, tostarp virusoloģijā, farmakoloģijā un ģenētiskajos pētījumos, kur nepieciešami ilgstoši novērošanas periodi.

Audums
Plaušas
Sinonīmi
  • WI 38 VA-13 subline 2RA
  • WI 38VA13 subline 2RA
  • WI-38 VA13 sub 2 RA
  • WI38-VA13 subline 2RA
  • WI38 VA13/2RA
  • WI38VA13/2RA
  • VA13 2RA
  • WI-38 VA13
  • WI 38 VA 13
  • WI38-VA13
  • WI38/VA13
  • WI38VA13
  • VA-13
  • VA13
  • AG07217
  • AG7217

02Klasifikācija

Organisms
Cilvēks
Sekss
Sieviete
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
Bioloģiskās drošības līmenis
2

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Epitēlijveidīgs
Šūnu tips
Fibroblasti
Kariotips
Hiperdiploīds, Modālais numurs: 73-78

04Identifikatori

Atsauce
WI 38 VA13 apakšlīnija 2RA (Cytion kataloga numurs 300421)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
9606
Cellosaurus
CVCL_2759

05Pazīmes un uzņēmība

Izoenzīmi
G6PD, B
Vīrusi
Satur papovavīrusu
Jutība pret vīrusiem
Herpes simplex, vezikulārais stomatīts (Indiana), poliovīruss 2
Reversā transkriptāze
Negatīvs

06Apstrāde un audzēšana

Barotne
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-glutamīns, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytion izstrādājuma numurs 820100a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildināt barotni ar 10% FBS
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
Sēšanas blīvums
1 x 104 šūnas/cm2
Šķidruma atjaunošana
1 līdz 2 reizes nedēļā
Atgūšanās pēc atkusņa
Pēc atkausēšanas izkliedējiet šūnas uz šķīvja ar blīvumu 5 x 104 šūnas/cm2 un ļaujiet šūnām atgūties no sasaldēšanas procesa un pielipt vismaz 48 stundas.
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

08Ziedotājs

Donora vecums
3 grūtniecības mēneši
Etniskā piederība
Kaukāzietis