Mine otse sisu juurde
HROC348
Kude
Sigmoidne käärsoolestik
Haigus
Kartsinoom
Metastaaside asukoht
Ei ole teatatud (sigmoidkoloni primaarne adenokartsinoom; proovi võtmise ajal ei olnud kinnitatud kaugmetastaase)

Dokumendid

HROC348

Cell line · Toote number 300719

HROC348 is a human colorectal carcinoma cell line derived from a primary tumor resected from an adult male patient diagnosed with sigmoid colon cancer. Th...

€800.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta
Laos
Lot
Soovitatav (värskeim partii)
  • CoA
1

01Üldine teave

Kirjeldus

HROC348 on inimese kolorektaalkartsinoomi rakuliin, mis on saadud täiskasvanud meessoost patsiendilt, kellel on diagnoositud sigmoidne käärsoolevähk, resekteeritud primaarsest kasvajast. Kasvaja klassifitseeriti mõõdukalt kaugelearenenud adenokartsinoomiks (T3, G3, N2), mis viitab märkimisväärsele lokaalsele invasiivsusele ja lümfisõlmede kaasatusele, mis on kooskõlas agressiivse kasvajakäitumisega. Kartsinoom pärines sigmoidse käärsoolest, mis on sporaadilise kolorektaalvähi tavaline anatoomiline paiknemine, ja sellel esines mikrosatelliitide stabiilsus (MSS), mis liigitab selle pigem kromosomaalse ebastabiilsuse (CIN) alatüüpi kui kolorektaalvähi MSI-kõrge hüpermutatsiooniga klassi.

HROC348 molekulaarprofiil näitab nii KRASi kui ka BRAFi metsikut tüüpi olekut, mis viitab sellele, et neis geenides puuduvad ühised aktiveerivad mutatsioonid, mis on sageli seotud kolorektaalvähi progresseerumise ja raviresistentsusega. Selline molekulaarne taust muudab HROC348 eriti sobivaks uuringuteks, mis keskenduvad mutatsioonita RAS/RAF-signalisatsioonile ja selle mõjudele kasvaja kasvule, ravivastusele ja resistentsuse mehhanismidele. Rakuliinil ei esine CpG-saarte metülaatori fenotüüpi (CIMP), mis toetab veelgi selle liigitamist tavapärase (mittehüpermutatsioonilise) kolorektaalvähi alarühma.

Kliiniliselt oli kasvaja positiivne lümfisõlmede metastaaside suhtes (LN_pos = 2), kuid kaugmetastaase (M) täheldati ainult üks kord ja parempoolse käärsoole kaasatust ei täheldatud, mis vastab vasakpoolse kolorektaalvähi profiilile. Need omadused koos MSS-staatuse ja molekulaarsete markeritega asetavad HROC348 representatiivseks mudeliks vasakpoolse KRAS/BRAF-vildtüüpi mikrosatelliitidega stabiilse kolorektaalse adenokartsinoomi uurimiseks. Samuti pakub see translatsioonilist väärtust sihtotstarbeliste ravimeetodite ja immuunsüsteemi moduleerivate ainete prekliiniliseks testimiseks MSS-kasvajate puhul, mis tavaliselt reageerivad immuunsüsteemi kontrollpunkti blokaadile vähem.

Kude
Sigmoidne käärsoolestik
Haigus
Kartsinoom
Metastaaside asukoht
Ei ole teatatud (sigmoidkoloni primaarne adenokartsinoom; proovi võtmise ajal ei olnud kinnitatud kaugmetastaase)
Rakendused
Kolorektaalvähi uurimine; KRAS/BRAF-i loodusliku tüübi MSS-kolorektaalvähi bioloogia; vasakpoolse kolorektaalvähi modelleerimine; ravimite tundlikkus mutatsioonivabades RAS/RAF-tuumorites; HROC Linnebacher’i biopanga uuringud; kolorektaalvähi immunoteraapia hindamine; prekliiniline onkoloogia

02Klassifikatsioon

Organism
Inimene
Sugu
Mees
Kasvuvõime
Järgija
GMO-staatus
GMO-vaba
GMO-staatuse üksikasjad
No genetic modification; wildtype patient-derived CRC cell line from the HROC Linnebacher biobank. KRAS wild-type, BRAF wild-type, MSS, CIMP-negative.
Bioloogilise ohutuse tase
1

03Omadused

Morfoloogia
Epiteelilaadsed
Rakutüüp
Epiteelirakud
MSI staatus
MSS

04Tunnused

Viide
HROC348 (Cytioni katalooginumber 300719)
NCBI maksukood
9606
Cellosaurus
Not assigned

05Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L glükoosi, w: 2,5 mM L-glutamiini, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM naatriumpüruvaati, w: 1,2 g/L NaHCO3 (Cytioni artikli number 820400a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Täiendada söötme 10% FBS-ga
Dissotsiatsioonireaktiiv
Accutase
Kultuuri edasikasvatamine
Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Vedeliku vahetus
2 kuni 3 korda nädalas
Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

07Annetaja

Doonori vanus
77 aastat
Etniline kuuluvus
Kaukaasia