Siirry sisältöön
Kudos
Haima
Sairaus
Adenokarsinooma
Synonyymit
Hpac

Asiakirjat

HPAC

Cell line · Tuotenumero 305309

€430.00ilman veroja ja toimituskuluja
Varastossa
Lot
Suositeltava (tuorein erä)
  • CoA
1

01Yleistä tietoa

Kuvaus

HPAC-solulinja, joka on peräisin ihmisen haiman duktaalisesta adenokarsinoomasta, on tärkeä malli haimasyövän molekyyli- ja soluominaisuuksien tutkimiseen. HPAC-soluilla on haimasyövälle tyypillisiä keskeisiä piirteitä, kuten resistenssimekanismeja, ja ne ovat tunnettuja siitä, että ne ovat käyttökelpoisia erilaisten kemoterapeuttisten aineiden ja signaalireittien vaikutusten arvioinnissa. Viimeaikaisissa HPAC-soluja koskevissa tutkimuksissa on keskitytty ymmärtämään lääkeresistenssiä, erityisesti erlotinibille, joka on epidermisen kasvutekijän reseptoriin (EGFR) kohdistuva tyrosiinikinaasin estäjä. Tutkimukset ovat osoittaneet, että HPAC-solujen erlotinibiresistenssiin liittyy merkittäviä metabolisia muutoksia, kuten muutoksia fosfolipidien ja aminohappojen aineenvaihdunnassa. Erityisesti lyhytketjuisten asyylikarnitiinien lisääntyneet pitoisuudet ja muutokset glyserofosfolipidiprofiileissa on yhdistetty kohonneeseen metaboliseen tilaan erlotinibille resistenteissä HPAC-soluissa.

HPAC-solut ilmentävät myös matriksin metalloproteinaaseja (MMP), erityisesti MT1-MMP:tä, joka on ratkaisevan tärkeää niiden invasiivisen käyttäytymisen kannalta. Wnt/β-kateniini-signalointireitin on todettu osallistuvan MMP:n ilmentymisen säätelyyn, mikä vaikuttaa osaltaan solujen migraatio- ja invasiopotentiaaliin. Matriinin kaltaisten yhdisteiden käytön on osoitettu estävän HPAC-solujen migraatiota alentamalla MT1-MMP:n toimintaa Wnt/β-kateniinisignaalin tukahduttamisen kautta. Nämä ominaisuudet korostavat, että HPAC on keskeinen solulinja, jolla voidaan tutkia terapeuttisia toimenpiteitä haimasyövän aggressiivisen ja hoitoresistentin luonteen lieventämiseksi.

Kudos
Haima
Sairaus
Adenokarsinooma
Synonyymit
  • Hpac

02Luokittelu

Organismi
Ihminen
Sukupuoli
Nainen
Kasvuominaisuudet
Kiinnittynyt
Bioturvallisuustaso
1

03Ominaisuudet

Morfologia
Epiteelin kaltainen
Solutyyppi
Haiman ductus-solu
Kasvaimia aiheuttava
Kyllä, athymic-hiirissä

04Tunnisteet

Lähdeviite
HPAC (Cytionin luettelonumero 305309)
NCBI-verotunnus
9606
Cellosaurus
CVCL_3517

05Ilmentyminen ja alttius

Proteiinin ilmentyminen

Ilmaistut geenit: keratiini positiivinen, vimentiini negatiivinen, kromograniini A negatiivinen

Epidermaalinen kasvutekijä (EGF), ilmentynyt; glukokortikoidi, ilmentynyt; epidermaalinen kasvutekijä (EGF); glukokortikoidi

Mutaatioprofiili
Mutaatio: CDKN2A, p.Glu120Ter (c.358G>T), homotsygoottinen; Mutaatio: CDKN2A, p.Glu120Ter (c.358G>T), homotsygoottinen: KRAS, p.Gly12Asp (c.35G>A); Mutaatio: KRAS, p.Gly12Asp (c.35G>A), homosoluinen: TP53

06Käsittely ja viljely

Viljelyalusta
DMEM:Ham's F12, 1,2 g/L natriumbikarbonaattia, 2,5 mM L-glutamiinia, 15 mM HEPES, 0,5 mM natriumpyruvaattia (0,002 mg/ml insuliinia, 0,005 mg/ml transferriiniä) ITS+, 40 ng/ml hydrokortisonia, 10 ng/ml hiiren epidermaalista kasvutekijää (Fisher Scientific cat# CB-40010)
Inkubaatioilma

37 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä.

Ravintolisät
Täydennetään elatusainetta 5 %:lla FBS:llä
Dissosiaatioreagenssi
Accutase
Soluviljely
Poista vanha väliaine tarttuneista soluista ja pese ne PBS:llä, josta puuttuu kalsiumia ja magnesiumia. Käytä T25-pulloissa 3-5 ml PBS:ää ja T75-pulloissa 5-10 ml. Peitä sitten solut kokonaan Accutase-valmisteella, käyttäen 1-2 ml T25-pulloissa ja 2,5 ml T75-pulloissa. Anna solujen inkuboitua huoneenlämmössä 8-10 minuuttia solujen irtoamiseksi. Inkuboinnin jälkeen solut sekoitetaan varovasti 10 ml:n väliaineella niiden resuspendoimiseksi ja sentrifugoidaan sitten 300xg:n nopeudella 3 minuutin ajan. Hävitä supernatantti, suspendoi solut uudelleen tuoreeseen väliaineeseen ja siirrä ne uusiin pulloihin, jotka sisältävät jo tuoretta väliaineita.
Nesteen uusiminen
2-3 kertaa viikossa
Sulatus ja viljely
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Laadunvalvonta ja kryosäilytys

Hedelmättömyys

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Jäädytysaine
Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa (mukaan lukien FBS) + 10 % DMSO:ta riittävän sulatuksen jälkeisen elinkelpoisuuden varmistamiseksi tai CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytyksen aiheuttamaa stressiä.
Säilytysolosuhteet

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Toimitusehdot

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

08Lahjoittaja

Luovuttajan ikä
64 vuotta
Etnisyys
Kaukasialainen