Pāriet uz saturu
Audums
Aizkuņģa dziedzeris
Slimība
Adenokarcinoma
Sinonīmi
Hpac

Dokumenti

HPAC

Cell line · Preces numurs 305309

€430.00bez nodokļa un piegādes izmaksām
Noliktavā
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
  • CoA
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

HPAC šūnu līnija, kas iegūta no cilvēka aizkuņģa dziedzera duktālās adenokarcinomas, kalpo kā būtisks modelis aizkuņģa dziedzera vēža molekulāro un šūnu īpašību izpētei. HPAC šūnas ir pazīstamas ar to lietderību dažādu ķīmijterapeitisko līdzekļu un signalizācijas ceļu ietekmes novērtēšanā, un tām piemīt galvenās aizkuņģa dziedzera vēzim raksturīgās īpašības, tostarp rezistences mehānismi. Nesen veiktajos pētījumos ar HPAC galvenā uzmanība ir pievērsta zāļu rezistences izpratnei, jo īpaši pret erlotinibu - tirozīnkināzes inhibitoru, kas ir vērsts pret epidermālā augšanas faktora receptoru (EGFR). Pētījumos ir pierādīts, ka rezistence pret erlotinibu HPAC šūnās ir saistīta ar būtiskām metabolisma izmaiņām, piemēram, fosfolipīdu un aminoskābju metabolisma izmaiņām. Konkrēti, paaugstināts īso ķēžu acilkarnitīnu līmenis un izmaiņas glicerofosfolipīdu profilos ir saistītas ar paaugstinātu metabolisma stāvokli erlotinibam rezistentās HPAC šūnās.

HPAC šūnas arī ekspresē matriksa metaloproteināzes (MMP), jo īpaši MT1-MMP, kas ir izšķirošs faktors to invazīvai uzvedībai. Wnt/β-katinīna signalizācijas ceļš ir iesaistīts MMP ekspresijas regulēšanā, veicinot šūnu migrācijas un invazijas potenciālu. Ir pierādīts, ka, izmantojot tādus savienojumus kā matrīns, tiek kavēta HPAC šūnu migrācija, samazinot MT1-MMP, nomācot Wnt/β-katenīna signalizāciju. Šīs īpašības liecina, ka HPAC ir galvenā šūnu līnija, lai pētītu terapeitiskās iejaukšanās, kuru mērķis ir mazināt aizkuņģa dziedzera vēža agresivitāti un rezistenci pret ārstēšanu.

Audums
Aizkuņģa dziedzeris
Slimība
Adenokarcinoma
Sinonīmi
  • Hpac

02Klasifikācija

Organisms
Cilvēks
Sekss
Sieviete
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Epitēlijveidīgs
Šūnu tips
Aizkuņģa dziedzera duktālās šūnas
Tumorogēns
Jā, atimiskām pelēm

04Identifikatori

Atsauce
HPAC (Cytion kataloga numurs 305309)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
9606
Cellosaurus
CVCL_3517

05Pazīmes un uzņēmība

Proteīnu ekspresija

Ekspresētie gēni: keratīns pozitīvs, vimentīns negatīvs, hromogranīns A negatīvs

Epidermālais augšanas faktors (EGF), izteikts; glikokortikoīds, izteikts; epidermālais augšanas faktors (EGF); glikokortikoīds

Mutāciju profils
Mutācija: CDKN2A, p.Glu120Ter (c.358G>T), homozigotiska; mutācija: KRAS, p.Gly12Asp (c.35G>A); mutācija: TP53

06Apstrāde un audzēšana

Barotne
DMEM: Ham's F12, 1,2 g/l nātrija bikarbonāts, 2,5 mM L-glutamīns, 15 mM HEPES, 0,5 mM nātrija piruvāts (0,002 mg/ml insulīna, 0,005 mg/ml transferīna) ITS+, 40 ng/ml hidrokortizona, 10 ng/ml peles epidermālā augšanas faktora (Fisher Scientific cat# CB-40010)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildināt barotni ar 5% FBS
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
Šķidruma atjaunošana
2 līdz 3 reizes nedēļā
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

08Ziedotājs

Donora vecums
64 gadi
Etniskā piederība
Kaukāzietis