iPSC-hDPSC

La lignée cellulaire iPSC-hDPSC représente un modèle de pointe dérivé des cellules souches de la pulpe dentaire humaine (hDPSC). Ces cellules proviennent du tissu de la pulpe dentaire, où elles subissent une digestion enzymatique pour isoler la fraction adhérente. Lorsqu'elles atteignent 70 à 80 % de confluence, les cellules sont sous-cultivées et cryopréservées au passage 1. Cette étape fondamentale est cruciale pour maintenir l'intégrité cellulaire et garantir la viabilité des cellules souches pour de futures applications.

La reprogrammation des hDPSC en cellules souches pluripotentes induites (iPSC) est une avancée significative, réalisée grâce à une technique de reprogrammation épisomale. Cette méthode utilise des vecteurs qui intègrent les facteurs Yamanaka - Oct-4, Sox-2 et Klf-4 - ainsi que la p53 anti-sens, l'EBNA-1 et un marqueur de protéine fluorescente rouge. L'approche épisomale est particulièrement avantageuse car elle évite l'intégration des facteurs de reprogrammation dans le génome, préservant ainsi la stabilité génétique des iPSC. La lignée iPSC-hDPSC qui en résulte présente des caractéristiques pluripotentes, ce qui en fait un outil précieux pour la recherche en médecine régénérative, la modélisation des maladies et la découverte de médicaments.

37°C, 5%_CO2, atmosphère humidifiée.

Pour améliorer le processus de détachement et de réensemencement des cellules, suivre les étapes suivantes :

1. Retirer le milieu usé et rincer les cellules avec du PBS (sans calcium ni magnésium).
2. Ajouter la solution de détachement et la laisser agir selon les instructions du fabricant.
3. Ajouter avec précaution du milieu frais aux cellules.
4. Dissocier doucement les cellules afin de les endommager le moins possible.
5. Enduire une nouvelle plaque de culture à 6 puits avec de la vitronectine et ensemencer les cellules dissociées dans deux puits pour la suite de la culture.

Pour assurer une croissance cellulaire optimale et une cohérence expérimentale, il est recommandé d'utiliser une densité d'ensemencement de 5 000 à 10 000 cellules/cm² une fois que les cellules se sont adaptées aux conditions de culture.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes basées sur la luminescence.

Pour s'assurer de l'absence de contamination bactérienne, fongique ou levurienne, les cultures cellulaires font l'objet d'inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placer les flacons dans de l'azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre -150 et -196 °C environ. Le stockage à -80 °C n'est acceptable qu'en tant qu'étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l'azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées sur glace sèche dans des emballages isolés et validés, avec suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d'environ -78 °C tout au long du transport. À la réception, inspecter immédiatement le conteneur et transférer sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous nous portons garants de la qualité et de la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours après l'expédition de nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d'analyse et/ou la fiche produit

Pour plus de détails, veuillez consulter notre <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default""> Déclaration de garantie