iPSC-hDPSC

La lignée cellulaire iPSC-hDPSC constitue un modèle de pointe dérivé de cellules souches de la pulpe dentaire humaine (hDPSC). Ces cellules proviennent du tissu pulpaire, où elles sont soumises à une digestion enzymatique afin d’en isoler la fraction adhérente. Lorsqu’elles atteignent une confluence de 70 à 80 %, les cellules sont repiquées et cryoconservées au passage 1. Cette étape fondamentale est cruciale pour préserver l’intégrité cellulaire et garantir la viabilité des cellules souches en vue d’applications futures.

La reprogrammation des hDPSC en cellules souches pluripotentes induites (iPSC) constitue une avancée significative, réalisée grâce à une technique de reprogrammation épisomale. Cette méthode utilise des vecteurs qui intègrent les facteurs de Yamanaka — Oct-4, Sox-2 et Klf-4 — ainsi que l’antisens p53, l’EBNA-1 et un marqueur protéique fluorescent rouge. L’approche épisomale est particulièrement avantageuse, car elle évite l’intégration des facteurs de reprogrammation dans le génome, préservant ainsi la stabilité génétique des iPSC. La lignée iPSC-hDPSC ainsi obtenue présente des caractéristiques pluripotentes, ce qui en fait un outil précieux pour la recherche en médecine régénérative, la modélisation des maladies et la découverte de médicaments.

37 °C, 5 % _de CO_₂, atmosphère humidifiée.

Pour améliorer le processus de détachement et de réensemencement des cellules, suivez les étapes suivantes :

1. Retirez le milieu usé et rincez les cellules avec du PBS (sans calcium ni magnésium).
2. Ajoutez la solution de détachement et laissez-la agir conformément aux instructions du fabricant.
3. Ajoutez délicatement du milieu frais aux cellules.
4. Dissociez délicatement les cellules afin de minimiser les dommages.
5. Enduire une plaque de culture neuve à 6 puits de vitronectine et ensemencer les cellules dissociées dans deux puits en vue d’une culture ultérieure.

Afin d’assurer une croissance cellulaire optimale et la cohérence des résultats expérimentaux, il est recommandé d’utiliser une densité d’ensemencement comprise entre 5 000 et 10 000 cellules/cm² une fois que les cellules se sont adaptées aux conditions de culture.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes par luminescence.

Afin de s’assurer qu’il n’y a aucune contamination bactérienne, fongique ou par des levures, les cultures cellulaires font l’objet d’inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placez les flacons dans de l’azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre environ −150 et −196 °C. L’entreposage à −80 °C n’est acceptable qu’à titre d’étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l’azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées dans de la glace sèche, dans un emballage isotherme validé contenant suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d’environ −78 °C pendant tout le transport. À la réception, inspectez immédiatement le conteneur et transférez sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous garantissons la qualité et la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours à compter de leur expédition depuis nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d’analyse et/ou la fiche technique du produit.

Pour plus de détails, veuillez consulter notre déclaration de garantie.