iPSC-hDPSC

A linha celular iPSC-hDPSC representa um modelo de ponta derivado de células-tronco da polpa dentária humana (hDPSCs). Essas células têm origem no tecido da polpa dentária, onde são submetidas a digestão enzimática para isolar a fração aderente. Ao atingirem 70-80% de confluência, as células são subcultivadas e criopreservadas na Passagem 1. Essa etapa fundamental é crucial para manter a integridade celular e garantir a viabilidade das células-tronco para aplicações futuras.

A reprogramação das hDPSCs em células-tronco pluripotentes induzidas (iPSCs) é um avanço significativo, alcançado por meio de uma técnica de reprogramação episomal. Esse método emprega vetores que incorporam os fatores de Yamanaka — Oct-4, Sox-2 e Klf-4 — juntamente com o p53 antisense, EBNA-1 e um marcador de proteína fluorescente vermelha. A abordagem episomal é particularmente vantajosa, pois evita a integração dos fatores de reprogramação no genoma, preservando assim a estabilidade genética das iPSCs. A linhagem resultante de iPSC-hDPSC exibe características pluripotentes, tornando-a uma ferramenta valiosa para pesquisas em medicina regenerativa, modelagem de doenças e descoberta de medicamentos.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

Para melhorar o processo de desprendimento e replantio das células, siga estas etapas:

1. Remova o meio usado e lave as células com PBS (sem cálcio e magnésio).
2. Adicione a solução de desprendimento e deixe agir conforme as instruções do fabricante.
3. Adicione cuidadosamente o meio fresco às células.
4. Dissocie as células delicadamente para garantir o mínimo de danos.
5. Revestir uma placa de cultura nova de 6 poços com vitronectina e semear as células dissociadas em dois poços para cultivo posterior.

Para garantir o crescimento celular ideal e a consistência experimental, recomenda-se utilizar uma densidade de semeadura de 5.000 a 10.000 células/cm² assim que as células se adaptarem às condições de cultura.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.