iPSC-hDPSC

La linea cellulare iPSC-hDPSC rappresenta un modello all'avanguardia derivato da cellule staminali della polpa dentale umana (hDPSC). Queste cellule provengono dal tessuto della polpa dentale, dove vengono sottoposte a digestione enzimatica per isolare la frazione aderente. Una volta raggiunta la confluenza del 70-80%, le cellule vengono subcoltivate e crioconservate al passaggio 1. Questa fase fondamentale è cruciale per il mantenimento delle cellule staminali della polpa dentale. Questo passaggio fondamentale è cruciale per mantenere l'integrità cellulare e garantire la vitalità delle cellule staminali per applicazioni future.

La riprogrammazione delle hDPSC in cellule staminali pluripotenti indotte (iPSC) è un progresso significativo, ottenuto attraverso una tecnica di riprogrammazione episomale. Questo metodo impiega vettori che incorporano i fattori Yamanaka - Oct-4, Sox-2 e Klf-4 - insieme a p53 antisenso, EBNA-1 e un marcatore di proteina rossa fluorescente. L'approccio episomale è particolarmente vantaggioso perché evita l'integrazione dei fattori di riprogrammazione nel genoma, preservando così la stabilità genetica delle iPSC. La linea iPSC-hDPSC risultante presenta caratteristiche di pluripotenza, che la rendono uno strumento prezioso per la ricerca in medicina rigenerativa, la modellazione di malattie e la scoperta di farmaci.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

Per migliorare il processo di distacco e risemina delle cellule, procedere come segue:

1. Rimuovere il terreno di coltura esaurito e sciacquare le cellule con PBS (senza calcio e magnesio).
2. Aggiungere la soluzione distaccante e lasciarla agire secondo le istruzioni del produttore.
3. Aggiungere con cautela il terreno fresco alle cellule.
4. Dissociare delicatamente le cellule per garantire un danno minimo.
5. Rivestire una nuova piastra di coltura a 6 pozzetti con vitronectina e seminare le cellule dissociate in due pozzetti per l'ulteriore coltivazione.

Per garantire una crescita cellulare ottimale e una coerenza sperimentale, si raccomanda di utilizzare una densità di semina di 5.000-10.000 cellule/cm² una volta che le cellule si sono adattate alle condizioni di coltura.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia