iPSC-hDPSC

La línea celular iPSC-hDPSC representa un modelo de vanguardia derivado de células madre de la pulpa dental humana (hDPSCs). Estas células proceden del tejido de la pulpa dental, donde se someten a digestión enzimática para aislar la fracción adherente. Una vez alcanzada una confluencia del 70-80%, las células se subcultivan y se criopreservan en el Paso 1. Este paso fundamental es crucial para mantener la integridad celular y garantizar la viabilidad de las células madre para futuras aplicaciones.

La reprogramación de hDPSCs en células madre pluripotentes inducidas (iPSCs) es un avance significativo, logrado mediante una técnica de reprogramación episomal. Este método emplea vectores que incorporan los factores de Yamanaka -Oct-4, Sox-2 y Klf-4- junto con p53 antisentido, EBNA-1 y un marcador de proteína roja fluorescente. El enfoque episomal es especialmente ventajoso, ya que evita la integración de los factores de reprogramación en el genoma, preservando así la estabilidad genética de las iPSC. La línea iPSC-hDPSC resultante presenta características pluripotentes, lo que la convierte en una valiosa herramienta para la investigación en medicina regenerativa, modelización de enfermedades y descubrimiento de fármacos.

37°C, 5%_CO2, atmósfera humidificada.

Para mejorar el proceso de desprendimiento y resiembra celular, siga estos pasos:

1. Retire el medio gastado y enjuague las células con PBS (sin calcio ni magnesio).
2. Añadir la solución de desprendimiento y dejar que actúe según las instrucciones del fabricante.
3. Añadir cuidadosamente medio fresco a las células.
4. Disociar suavemente las células para garantizar un daño mínimo.
5. Recubrir una placa de cultivo de 6 pocillos nueva con vitronectina y sembrar las células disociadas en dos pocillos para su posterior cultivo.

Para garantizar un crecimiento celular óptimo y la coherencia experimental, se recomienda utilizar una densidad de siembra de 5.000 a 10.000 células/cm² una vez que las células se hayan adaptado a las condiciones de cultivo.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminación por micoplasma se excluye utilizando tanto ensayos basados en la PCR como métodos de detección de micoplasma basados en la luminiscencia.

Para garantizar la ausencia de contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, colocar los viales en nitrógeno líquido en fase vapor a una temperatura aproximada de -150 a -196 °C. El almacenamiento a -80 °C sólo es aceptable como breve paso intermedio antes de la transferencia al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares crioconservadas se envían en hielo seco en envases validados y aislados con suficiente refrigerante para mantener aproximadamente -78 °C durante el tránsito. A la recepción, inspeccione el envase inmediatamente y transfiera los viales sin demora al almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante los 60 días posteriores al envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales se ajustan a las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o Hoja de Producto

Para más información, consulte nuestra <a href=""/Quiénes somos/Garantía/"" hreflang=""x-default"">Declaración de garantía