P19

A P19 sejtvonalat, a pluripotens embrionális karcinóma egyik típusát eredetileg C3H/He törzsű egérben kialakult teratocarcinomából nyerték. Ez az epitélszerű sejtvonal nagy hatékonysággal képes klónozni, ha 0,1 mM β-merkaptoetanollal infundált táptalajban tenyésztik. A P19 sejtek figyelemre méltó jellemzője, hogy retinsav hatására képesek neuronális és gliasejtekké differenciálódni. Ezzel egyidejűleg képesek szív- és vázizommá alakulni, ha dimetil-szulfoxidnak (DMSO) vannak kitéve. Retinsavnak és DMSO-nak egyaránt kitéve túlnyomórészt a retinsav indukálta differenciálódás jellemzőit mutatják.

A P19 sejtvonal az egérből (Mus musculus) származik, és az Eukaryota, Animalia, Metazoa, Chordata, Vertebrata és Tetrapoda széles körű osztályozásába tartozik. A sejtek az embrióból származó epithelialis szövettípus morfológiáját testesítik meg, és a teratocarcinoma betegséggel hozhatók összefüggésbe. Elsősorban 3D-s sejttenyésztési alkalmazásokban használják őket az állati sejtek termékkategóriáján belül.

Miközben a rákos sejtek gyors és agresszív növekedésük miatt jelentős egészségügyi veszélyt jelentenek, felbecsülhetetlen értékű erőforrást jelentenek a rákos sejtek fejlődését tanulmányozó és célzottabb kezelést kereső kutatók számára is. A P19 sejtvonalat 1982-ben hozták létre, amikor McBurney és Rogers egy 7,5 napos egérembriót ültetett át egy herébe, hogy tumoros növekedést indukáljon. Sikeresen izoláltak sejtkultúrákat a primer tumorból, amelyek differenciálatlan őssejteket tartalmaztak, ezeket nevezték el embriókarcinóma P19 sejteknek. Ezek a sejtek gyors növekedést mutattak feeder sejtek nélkül, és könnyen fenntarthatók voltak. Egy másik egértörzs blasztocisztáiba történő későbbi befecskendezés megerősítette a P19 sejtek multipotenciáját, mivel a recipiens egérben mindhárom csírarétegből származó szövetek növekedtek.

Az eredeti P19 sejtekből számos altípusú sejtvonalat származtattak, köztük a P19S18, P19D3, P19RAC65 és P19C16 sejteket. Ezen altípusok mindegyike egyedi differenciálódási képességgel rendelkezik neuronális sejtekké vagy izomsejtekké, ha retinsavval vagy DMSO-val kezelik őket. Újabb tanulmányokban differenciált P19 sejtekből származó sejtvonalakat hoztak létre, amelyek a P19 sejtek pluripotenciájának köszönhetően képesek ektoderma, mezoderma és endoderma-szerű sejtekké alakulni.

A P19 sejtek arról ismertek, hogy szérummal kiegészített közegben tartósan növekednek. Differenciálódásuk nem toxikus gyógyszerekkel, például retinsavval hatékonyan szabályozható, ami neuronok, asztroglia és mikroglia kialakulásához vezet. Másrészt a DMSO-nak kitett P19 sejtek aggregátumai endodermális és mezodermális származékokká differenciálódnak, beleértve a szív- és vázizmot is. A P19 sejtek rekombináns géneket kódoló DNS-sel történő transzfekcióra is alkalmasak, és az ilyen géneket expresszáló stabil vonalak kényelmesen izolálhatók. Ez az alakíthatóság és sokoldalúság teszi a P19 sejteket kiváló forrássá a differenciálódó pluripotens sejtek fejlődési döntéseit irányító molekuláris mechanizmusok feltárására.

37°C, 5%_CO2, párásított légkör.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A mikoplazma-szennyeződést mind a PCR-alapú vizsgálatokkal, mind a lumineszcencia-alapú mikoplazma-kimutatási módszerekkel kizárják.

A bakteriális, gombás vagy élesztőgombás szennyeződés elkerülése érdekében a sejtkultúrákat napi vizuális ellenőrzésnek vetik alá.

Hosszú távú tartósítás céljából helyezze az üvegeket gőzfázisú folyékony nitrogénbe, körülbelül -150 és -196 °C közötti hőmérsékleten. A -80 °C-on történő tárolás csak rövid átmeneti lépésként fogadható el a folyékony nitrogénbe való átvitel előtt.

A kriokonzervált sejtvonalakat szárazjégen, validált, szigetelt csomagolásban szállítják, elegendő hűtőközeggel, hogy a szállítás során a hőmérsékletet körülbelül -78 °C-on tartsák. Átvételkor azonnal vizsgálja meg a tárolóedényt, és haladéktalanul helyezze át az injekciós üvegeket a megfelelő tárolóhelyre.

A Cytionnál kiállunk termékeink minősége és életképessége mellett. Garantáljuk, hogy sejtjeink a tenyésztés megkezdésekor életképesek lesznek, a létesítményünkből történő kiszállítás után 60 napig. Biztosítjuk, hogy minden anyag megfelel az analitikai tanúsítványban és/vagy a terméklapon leírt specifikációknak

A teljes részleteket lásd <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Garancia nyilatkozatunkban