P19

A linhagem celular P19, um tipo de carcinoma embrionário pluripotente, foi inicialmente obtida a partir de um teratocarcinoma em um camundongo da linhagem C3H/He. Essa linhagem celular de tipo epitelial apresenta a capacidade de se clonar com alta eficiência quando cultivada em meio enriquecido com 0,1 mM de β-mercaptoetanol. Uma característica notável das células P19 é sua capacidade de se diferenciar em células neuronais e gliais quando expostas ao ácido retinóico. Simultaneamente, elas têm o potencial de se transformar em músculo cardíaco e esquelético quando expostas ao dimetilsulfóxido (DMSO). Quando submetidas tanto ao ácido retinóico quanto ao DMSO, elas apresentam predominantemente características de diferenciação induzida pelo ácido retinóico.

A linhagem celular P19 tem origem no camundongo (Mus musculus) e pertence à ampla classificação de Eukaryota, Animalia, Metazoa, Chordata, Vertebrata e Tetrapod. As células apresentam a morfologia de um tipo de tecido epitelial derivado do embrião e estão associadas à doença teratocarcinoma. Elas são utilizadas principalmente em aplicações de cultura celular 3D dentro da categoria de produtos de células animais.

Embora as células cancerosas representem uma ameaça significativa à saúde devido ao seu crescimento rápido e agressivo, elas também oferecem um recurso inestimável para pesquisadores que estudam o desenvolvimento das células cancerosas e buscam tratamentos mais direcionados. Em 1982, a linhagem celular P19 foi criada quando um embrião de camundongo com 7,5 dias foi transplantado para um testículo a fim de induzir o crescimento tumoral, por McBurney e Rogers. Eles isolaram com sucesso culturas celulares do tumor primário contendo células-tronco indiferenciadas, denominadas células de carcinoma embrionário P19. Essas células demonstraram crescimento rápido sem a necessidade de células alimentadoras e eram fáceis de manter. A injeção subsequente em blastocistos de outra linhagem de camundongo confirmou a multipotência das células P19, já que tecidos de todas as três camadas germinativas cresceram no camundongo receptor.

Várias linhagens celulares de subtipos foram derivadas das células P19 originais, incluindo P19S18, P19D3, P19RAC65 e P19C16. Cada um desses subtipos possui capacidades únicas de diferenciação em células neuronais ou musculares quando tratado com ácido retinóico ou DMSO, respectivamente. Estudos mais recentes geraram linhagens celulares derivadas de células P19 diferenciadas, as quais, devido à pluripotência das células P19, podem se transformar em células semelhantes ao ectoderma, mesoderma e endoderma.

As células P19 são conhecidas por seu crescimento sustentado em meios suplementados com soro. Sua diferenciação pode ser controlada de forma eficaz por meio de fármacos não tóxicos, como o ácido retinóico, levando ao desenvolvimento de neurônios, astrócitos e microglia. Por outro lado, agregados de células P19 expostos ao DMSO se diferenciam em derivados endodérmicos e mesodérmicos, incluindo músculos cardíaco e esquelético. As células P19 também são passíveis de transfecção com DNA que codifica genes recombinantes, e linhas estáveis que expressam esses genes podem ser convenientemente isoladas. Essa maleabilidade e versatilidade tornam as células P19 um excelente recurso para explorar os mecanismos moleculares que regem as decisões de desenvolvimento das células pluripotentes em diferenciação.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.