P19

Linia komórkowa P19, rodzaj pluripotencjalnego raka embrionalnego, została początkowo uzyskana z potworniaka u myszy szczepu C3H/He. Ta podobna do nabłonka linia komórkowa wykazuje zdolność do klonowania z wysoką wydajnością, gdy jest hodowana w pożywce zawierającej 0,1 mM β-merkaptoetanolu. Godną uwagi cechą komórek P19 jest ich zdolność do różnicowania się w komórki neuronalne i glejowe pod wpływem kwasu retinowego. Jednocześnie mają one potencjał do przekształcania się w mięśnie sercowe i szkieletowe pod wpływem dimetylosulfotlenku (DMSO). Poddane działaniu zarówno kwasu retinowego, jak i DMSO, wykazują głównie cechy różnicowania indukowanego kwasem retinowym.

Linia komórkowa P19 pochodzi od myszy (Mus musculus) i należy do szerokiej klasyfikacji Eukaryota, Animalia, Metazoa, Chordata, Vertebrata i Tetrapoda. Komórki te mają morfologię typu tkanki nabłonkowej pochodzącej z zarodka i są związane z chorobą teratocarcinoma. Są one wykorzystywane głównie w hodowlach komórkowych 3D w ramach kategorii produktów komórek zwierzęcych.

Podczas gdy komórki nowotworowe stanowią poważne zagrożenie dla zdrowia ze względu na ich szybki i agresywny wzrost, stanowią one również nieocenione źródło informacji dla naukowców badających rozwój komórek nowotworowych i poszukujących bardziej ukierunkowanych metod leczenia. W 1982 roku McBurney i Rogers stworzyli linię komórkową P19, przeszczepiając 7,5-dniowy zarodek myszy do jądra w celu wywołania wzrostu guza. Udało im się wyizolować hodowle komórkowe z guza pierwotnego zawierające niezróżnicowane komórki macierzyste, nazwane komórkami raka zarodkowego P19. Komórki te wykazywały szybki wzrost bez potrzeby stosowania komórek zasilających i były łatwe w utrzymaniu. Późniejsze wstrzyknięcie do blastocyst innego szczepu myszy potwierdziło multipotencjalność komórek P19, ponieważ tkanki ze wszystkich trzech warstw zarodkowych rosły u myszy biorcy.

Z oryginalnych komórek P19 wyprowadzono kilka podtypów linii komórkowych, w tym P19S18, P19D3, P19RAC65 i P19C16. Każdy z tych podtypów posiada unikalne zdolności różnicowania się w komórki neuronalne lub mięśniowe, gdy jest traktowany odpowiednio kwasem retinowym lub DMSO. Nowsze badania wygenerowały linie komórkowe pochodzące ze zróżnicowanych komórek P19, które dzięki pluripotencji komórek P19 mogą przekształcać się w komórki ektodermalne, mezodermalne i endodermalne.

Komórki P19 znane są z trwałego wzrostu w pożywce z dodatkiem surowicy. Ich różnicowanie można skutecznie kontrolować za pomocą nietoksycznych leków, takich jak kwas retinowy, co prowadzi do rozwoju neuronów, astrogleju i mikrogleju. Z drugiej strony, agregaty komórek P19 wystawione na działanie DMSO różnicują się w pochodne endodermalne i mezodermalne, w tym mięśnie sercowe i szkieletowe. Komórki P19 są również podatne na transfekcję DNA kodującym rekombinowane geny, a stabilne linie wyrażające te geny można wygodnie izolować. Ta plastyczność i wszechstronność sprawiają, że komórki P19 są doskonałym źródłem do badania mechanizmów molekularnych, które regulują decyzje rozwojowe różnicujących się komórek pluripotencjalnych.

37°C, 5%_CO2, nawilżona atmosfera.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

W Cytion gwarantujemy jakość i żywotność naszych produktów. Gwarantujemy, że nasze komórki będą żywotne na początku hodowli przez 60 dni po wysyłce z naszych zakładów. Zapewniamy, że wszystkie materiały są zgodne ze specyfikacjami opisanymi w certyfikacie analizy i/lub karcie produktu

Szczegółowe informacje można znaleźć w naszej <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Oświadczeniu gwarancyjnym