P19

A linha de células P19, um tipo de carcinoma embrionário pluripotente, foi inicialmente obtida a partir de um teratocarcinoma num ratinho da estirpe C3H/He. Esta linha de células de tipo epitelial apresenta a capacidade de clonar com elevada proficiência quando cultivada num meio infundido com 0,1 mM de β-mercaptoetanol. Uma caraterística notável das células P19 é a sua adaptabilidade para se diferenciarem em células neuronais e gliais quando expostas ao ácido retinóico. Simultaneamente, têm o potencial de se transformarem em músculo cardíaco e esquelético quando expostas a dimetilsulfóxido (DMSO). Quando submetidas tanto ao ácido retinóico como ao DMSO, apresentam predominantemente caraterísticas de diferenciação induzida pelo ácido retinóico.

A linha celular P19 é originária do rato (Mus musculus) e pertence à classificação geral de Eukaryota, Animalia, Metazoa, Chordata, Vertebrata e Tetrapod. As células apresentam a morfologia de um tipo de tecido epitelial derivado do embrião e estão associadas à doença do teratocarcinoma. São principalmente utilizadas em aplicações de cultura de células 3D na categoria de produtos de células animais.

Embora as células cancerígenas representem uma ameaça significativa para a saúde devido ao seu crescimento rápido e agressivo, oferecem também um recurso inestimável para os investigadores que estudam o desenvolvimento das células cancerígenas e procuram tratamentos mais direcionados. Em 1982, a linha celular P19 foi criada quando um embrião de rato de 7,5 dias foi transplantado para um testículo para induzir o crescimento de um tumor por McBurney e Rogers. Isolaram com sucesso culturas de células do tumor primário contendo células estaminais indiferenciadas, denominadas células de carcinoma embrionário P19. Estas células demonstraram um crescimento rápido sem a necessidade de células de alimentação e eram fáceis de manter. A injeção subsequente em blastocistos de outra estirpe de ratinho confirmou a multipotência das células P19, uma vez que os tecidos das três camadas germinativas cresceram no ratinho recetor.

Foram derivadas várias linhas celulares de subtipos a partir das células P19 originais, incluindo P19S18, P19D3, P19RAC65 e P19C16. Cada um destes subtipos possui capacidades únicas de diferenciação em células neuronais ou células musculares quando tratadas com ácido retinóico ou DMSO, respetivamente. Estudos mais recentes geraram linhas celulares derivadas de células P19 diferenciadas, que, devido à pluripotência das células P19, podem transformar-se em células do tipo ectoderme, mesoderme e endoderme.

As células P19 são conhecidas pelo seu crescimento sustentado em meios suplementados com soro. A sua diferenciação pode ser eficazmente controlada utilizando drogas não tóxicas como o ácido retinóico, levando ao desenvolvimento de neurónios, astroglia e microglia. Por outro lado, os agregados de células P19 expostos a DMSO diferenciam-se em derivados endodérmicos e mesodérmicos, incluindo músculo cardíaco e esquelético. As células P19 também são passíveis de transfecção com ADN que codifica genes recombinantes, e podem ser convenientemente isoladas linhas estáveis que expressam esses genes. Esta maleabilidade e versatilidade fazem das células P19 um excelente recurso para explorar os mecanismos moleculares que regem as decisões de desenvolvimento das células pluripotentes em diferenciação.

37°C, 5%_CO2, atmosfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

Na Cytion, nós garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células serão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou Folha de Produto

Para mais informações, consulte a nossa <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Declaração de Garantia