P19

P19-cellelinjen, en type pluripotent embryonalt karsinom, ble opprinnelig utvunnet fra et teratokarsinom i en C3H/He-stamme av mus. Denne epitel-lignende cellelinjen viser evne til å klone seg med høy effektivitet når den dyrkes i et medium tilsatt 0,1 mM β-merkaptoetanol. Et bemerkelsesverdig trekk ved P19-cellene er deres evne til å differensiere til nevron- og gliaceller når de utsettes for retinsyre. Samtidig har de potensial til å forvandle seg til hjerte- og skjelettmuskulatur når de utsettes for dimetylsulfoksid (DMSO). Når de utsettes for både retinsyre og DMSO, viser de først og fremst kjennetegn på retinsyreindusert differensiering.

P19-cellelinjen stammer fra mus (Mus musculus) og tilhører den brede klassifiseringen av Eukaryota, Animalia, Metazoa, Chordata, Vertebrata og Tetrapod. Cellene har morfologien til en epitelial vevstype som stammer fra embryoet, og er forbundet med sykdommen teratokarsinom. De brukes primært i 3D-cellekulturapplikasjoner innenfor produktkategorien dyreceller.

Samtidig som kreftceller utgjør en betydelig helsetrussel på grunn av sin raske og aggressive vekst, er de også en uvurderlig ressurs for forskere som studerer kreftcellenes utvikling og søker mer målrettede behandlinger. I 1982 ble P19-cellelinjen skapt ved at McBurney og Rogers transplanterte et 7,5 dager gammelt museembryo inn i en testis for å indusere tumorvekst. De lyktes med å isolere cellekulturer fra den primære svulsten som inneholdt udifferensierte stamceller, kalt embryonale karsinom P19-celler. Disse cellene viste rask vekst uten behov for feederceller og var enkle å vedlikeholde. Etterfølgende injeksjon i blastocyster fra en annen musestamme bekreftet P19-cellenes multipotens, ettersom vev fra alle tre kimlagene vokste i mottakermusen.

Flere subtypecellelinjer har blitt avledet fra de opprinnelige P19-cellene, inkludert P19S18, P19D3, P19RAC65 og P19C16. Hver av disse subtypene har unike differensieringsegenskaper til nevronale celler eller muskelceller når de behandles med henholdsvis retinsyre eller DMSO. Nyere studier har generert cellelinjer avledet fra differensierte P19-celler, som på grunn av P19-cellenes pluripotens kan transformeres til ektoderm-, mesoderm- og endodermlignende celler.

P19-celler er kjent for sin vedvarende vekst i serumtilførte medier. Differensieringen kan kontrolleres effektivt ved hjelp av ikke-toksiske stoffer som retinsyre, noe som fører til utvikling av nevroner, astroglia og mikroglia. På den annen side differensierer aggregater av P19-celler som eksponeres for DMSO, til endodermale og mesodermale derivater, inkludert hjerte- og skjelettmuskulatur. P19-celler kan også transfekteres med DNA som koder for rekombinante gener, og stabile linjer som uttrykker disse genene, kan enkelt isoleres. Denne formbarheten og allsidigheten gjør P19-celler til en utmerket ressurs for å utforske de molekylære mekanismene som styrer utviklingsbeslutningene til differensierende pluripotente celler.

37 °C, 5 %_CO2, befuktet atmosfære.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasma-kontaminering utelukkes ved hjelp av både PCR-baserte analyser og luminescensbaserte metoder for påvisning av mykoplasma.

For å sikre at det ikke finnes bakterie-, sopp- eller gjærkontaminering, blir cellekulturene inspisert visuelt hver dag.

For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.

Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.

Hos Cytion står vi bak kvaliteten og levedyktigheten til produktene våre. Vi garanterer at cellene våre vil være levedyktige ved starten av dyrkingen i 60 dager etter at de er sendt fra våre anlegg. Vi forsikrer at alle materialer er i samsvar med spesifikasjonene som er beskrevet i analysesertifikatet og/eller produktarket

For fullstendig informasjon, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring