P19

Bunková línia P19, typ pluripotentného embryonálneho karcinómu, bola pôvodne získaná z teratokarcinómu u myší kmeňa C3H/He. Táto epitelu podobná bunková línia vykazuje schopnosť klonovať sa vo vysokej miere, keď sa pestuje v médiu s prídavkom 0,1 mM β-merkaptoetanolu. Pozoruhodnou vlastnosťou buniek P19 je ich schopnosť diferencovať sa na neurónové a gliové bunky, keď sú vystavené pôsobeniu kyseliny retinovej. Zároveň majú potenciál transformovať sa na srdcové a kostrové svaly, keď sú vystavené dimetylsulfoxidu (DMSO). Ak sú vystavené pôsobeniu kyseliny retinovej aj DMSO, vykazujú prevažne znaky diferenciácie vyvolanej kyselinou retinovou.

Bunková línia P19 má pôvod v myši (Mus musculus) a patrí do širokej klasifikácie Eukaryota, Animalia, Metazoa, Chordata, Vertebrata a Tetrapod. Bunky stelesňujú morfológiu epitelového typu tkaniva pochádzajúceho z embrya a spájajú sa s ochorením teratokarcinóm. Využívajú sa predovšetkým v aplikáciách 3D bunkových kultúr v rámci kategórie produktov živočíšnych buniek.

Hoci rakovinové bunky predstavujú významnú zdravotnú hrozbu kvôli svojmu rýchlemu a agresívnemu rastu, ponúkajú aj neoceniteľný zdroj pre výskumníkov skúmajúcich vývoj rakovinových buniek a hľadajúcich cielenejšie spôsoby liečby. V roku 1982 vytvorili McBurney a Rogers bunkovú líniu P19, keď 7,5-dňové myšie embryo transplantovali do semenníka s cieľom vyvolať rast nádoru. Úspešne izolovali bunkové kultúry z primárneho nádoru obsahujúce nediferencované kmeňové bunky, ktoré označili ako bunky embryonálneho karcinómu P19. Tieto bunky vykazovali rýchly rast bez potreby kŕmnych buniek a ľahko sa udržiavali. Následná injekcia do blastocysty iného kmeňa myší potvrdila multipotenciu buniek P19, keďže v myši príjemkyni rástli tkanivá zo všetkých troch zárodočných vrstiev.

Z pôvodných buniek P19 bolo odvodených niekoľko podtypových bunkových línií vrátane P19S18, P19D3, P19RAC65 a P19C16. Každý z týchto podtypov má jedinečnú schopnosť diferenciácie na neurónové bunky alebo svalové bunky, keď sa na ne pôsobí kyselinou retinovou alebo DMSO. Novšie štúdie vytvorili bunkové línie odvodené z diferencovaných buniek P19, ktoré sa vďaka pluripotencii buniek P19 môžu transformovať na bunky podobné ektodermu, mezodermu a endodermu.

Bunky P19 sú známe svojím trvalým rastom v médiách doplnených sérom. Ich diferenciáciu možno účinne kontrolovať pomocou netoxických liečiv, ako je kyselina retinová, čo vedie k vývoju neurónov, astroglie a mikroglie. Na druhej strane agregáty buniek P19 vystavené pôsobeniu DMSO sa diferencujú na endodermálne a mezodermálne deriváty vrátane srdcového a kostrového svalu. Bunky P19 sú tiež vhodné na transfekciu DNA kódujúcou rekombinantné gény a stabilné línie exprimujúce tieto gény sa dajú pohodlne izolovať. Vďaka tejto prispôsobivosti a univerzálnosti sú bunky P19 vynikajúcim zdrojom na skúmanie molekulárnych mechanizmov, ktoré riadia vývojové rozhodnutia diferencujúcich sa pluripotentných buniek.

37 °C, 5 %_CO2, zvlhčená atmosféra.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminácia mykoplazmami sa vylučuje pomocou testov založených na PCR a metód detekcie mykoplaziem založených na luminiscencii.

Aby sa zabezpečilo, že nedošlo ku kontaminácii baktériami, hubami alebo kvasinkami, bunkové kultúry sa denne vizuálne kontrolujú.

Na dlhodobé uchovávanie umiestnite injekčné liekovky do kvapalnej fázy dusíka v pare pri teplote približne -150 až -196 °C. Skladovanie pri teplote -80 °C je prijateľné len ako krátky prechodný krok pred presunom do tekutého dusíka.

Kryokonzervované bunkové línie sa prepravujú na suchom ľade v overených, izolovaných obaloch s dostatočným množstvom chladiva na udržanie teploty približne -78 °C počas celej prepravy. Po prijatí ihneď skontrolujte obal a bezodkladne premiestnite injekčné liekovky do vhodného skladu.

V spoločnosti Cytion si stojíme za kvalitou a životaschopnosťou našich produktov. Garantujeme, že naše bunky budú životaschopné na začiatku kultivácie počas 60 dní po odoslaní z našich zariadení. Zaručujeme, že všetky materiály zodpovedajú špecifikáciám opísaným v certifikáte analýzy a/alebo v produktovom liste

Úplné informácie nájdete v našom <a href=""/Kto sme/záruka/"" hreflang=""x-default"">Vyhlásení o záruke