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A549/DDP
Tessuto
Polmone

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A549/DDP

Cell line · Codice prodotto 305047

La linea cellulare A549/DDP è una variante resistente ai farmaci della linea cellulare A549, che a sua volta costituisce un modello di adenocarcinoma epiteliale basale alveolare umano. Questa ...

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1

01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare A549/DDP è una variante resistente ai farmaci della linea cellulare A549, che a sua volta è un modello di adenocarcinoma basale alveolare umano. Questa variante è stata selezionata specificamente per la sua resistenza al cisplatino (DDP), un comune farmaco chemioterapico utilizzato nel trattamento di vari tipi di cancro, tra cui quello del polmone. Lo sviluppo della linea cellulare A549/DDP consente ai ricercatori di studiare i meccanismi alla base della chemioresistenza, che rappresenta una sfida importante nella terapia del cancro.

Nella ricerca, la linea cellulare A549/DDP viene utilizzata per studiare le vie biochimiche coinvolte nella resistenza al cisplatino. Ciò include l'esplorazione dei cambiamenti nell'espressione genica, nella funzione delle proteine e nel metabolismo cellulare che conferiscono resistenza al cisplatino. La linea cellulare è anche preziosa per lo screening di nuovi farmaci o combinazioni di farmaci in grado di superare la resistenza, fornendo spunti fondamentali per lo sviluppo di strategie terapeutiche più efficaci contro il cancro del polmone.

Inoltre, gli studi condotti con la linea cellulare A549/DDP contribuiscono a una migliore comprensione delle basi molecolari della progressione e delle metastasi del tumore al polmone nel contesto della chemioresistenza. Questa linea cellulare è uno strumento fondamentale per la ricerca traslazionale, che collega i risultati sperimentali alle potenziali applicazioni cliniche in oncologia.

Tessuto
Polmone

02Classificazione

Organismo
Umano
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Epiteliale

04Identificatori

Riferimento bibliografico
A549/DDP (numero di catalogo Cytion 305047)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_C0W4

05Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
RPMI 1640, w: 2,0 mM di glutammina stabile, w: 2,0 g/L di NaHCO3 (articolo Cytion numero 820700a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.