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Cellule A549
Tessuto
Polmone
Malattia
Carcinoma
Sinonimi
A 549, A-549, NCI-A549, hA54

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Cellule A549

Cell line · Codice prodotto 300114

Le cellule A549, derivate da tessuto di adenocarcinoma polmonare, costituiscono un modello fondamentale utilizzato nella ricerca sul cancro, in particolare nei laboratori biomedici specializzati in patologie polmonari...

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01Informazioni generali

Descrizione

Le cellule A549, derivate da tessuto di adenocarcinoma polmonare, sono un modello primario utilizzato nella ricerca sul cancro, in particolare nei laboratori biomedici che si occupano di tumori polmonari. Le cellule A549 sono comunemente utilizzate come modello in vitro per studiare la biologia del cancro del polmone, lo screening dei farmaci e gli effetti dei composti tossici.

Nella ricerca tossicologica, le cellule A549 offrono un modello sperimentale controllato che consente agli scienziati di esplorare i meccanismi alla base degli effetti tossici e delle risposte cellulari. Grazie alla comprensione di questi meccanismi, i ricercatori possono valutare meglio la sicurezza delle sostanze e potenzialmente mitigarne gli effetti nocivi.

Le cellule di carcinoma A549 sono state ampiamente utilizzate come modello in vitro per studiare la patogenesi del cancro al polmone e come modello alternativo di coltura tissutale per vari studi di ricerca legati al polmone nei laboratori biomedici. Queste cellule mantengono le caratteristiche delle cellule epiteliali alveolari di tipo II e sono utilizzate per esaminare le risposte epiteliali a varie infezioni e stimoli infiammatori, compresa l'infiammazione polmonare.

Inoltre, la linea cellulare umana A549 è uno strumento prezioso per lo sviluppo di anticorpi specifici che mirano a proteine o marcatori legati al cancro del polmone. Esponendo queste cellule a sostanze di interesse, i ricercatori possono studiare come queste influenzino la vitalità cellulare, la proliferazione, l'apoptosi e altri processi cellulari. Queste informazioni contribuiscono all'identificazione di potenziali bersagli terapeutici e allo sviluppo di nuovi trattamenti per il cancro del polmone.

In sintesi, le cellule di carcinoma A549 sono fondamentali per la ricerca sul cancro, soprattutto per quanto riguarda i tumori polmonari, in quanto fungono da modello in vitro per la ricerca sul cancro e sulla tossicologia, per lo sviluppo di trattamenti efficaci e per lo screening dei farmaci.

Tessuto
Polmone
Malattia
Carcinoma
Sinonimi
  • A 549
  • A-549
  • NCI-A549
  • hA54

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Maschio
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Simile all'epitelio
Cariotipo
Le cellule A549 hanno un numero modale di cromosomi n2, con alcune cellule con 64 cromosomi.
Tempo di raddoppio
28 ore

04Identificatori

Riferimento bibliografico
A549 (numero di catalogo Cytion 300114)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_0023

05Espressione e suscettibilità

Espressione proteica
P53 positivo
Isoenzimi
G6PD, tipo B
Trascriptasi inversa
Negativo

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L di glucosio, w: 2,5 mM di L-Glutammina, w: 15 mM di HEPES, w: 0,5 mM di Sodio piruvato, w: 1,2 g/L di NaHCO3 (articolo Cytion numero 820400a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
1 x 104 cellule/cm2
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Recupero post-scongelamento
Dopo lo scongelamento, piastrare le cellule a 5 x 104 cellule/cm2 e lasciare che le cellule si riprendano dal processo di congelamento e aderiscano per almeno 24 ore.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
58 anni
Etnia
Caucasico