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COX
Tessuto
Sangue periferico
Malattia
Linfoma di Burkitt
Sinonimi
LCL (DR3)

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COX

Cell line · Codice prodotto 302138

La linea cellulare COX è una linea cellulare linfoblastoide B (B-LCL) di riferimento, derivata da un donatore umano e trasformata dal virus di Epstein-Barr (EBV). È frequente...

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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare COX è una linea cellulare B-linfoblastoide di riferimento (B-LCL) derivata da un donatore umano e trasformata con il virus di Epstein-Barr (EBV). È spesso utilizzata nella ricerca immunogenetica e di istocompatibilità grazie alla sua inclusione nei pannelli dell'International Histocompatibility Working Group (IHWG). La linea cellulare COX rappresenta uno specifico aplotipo del complesso maggiore di istocompatibilità (MHC), HLA-A1-B8-Cw7-DR3-DQ2, associato alla suscettibilità a malattie autoimmuni come il diabete di tipo 1, il lupus eritematoso sistemico e la miastenia grave. Questo aplotipo si distingue per l'elevato grado di linkage disequilibrium, che rende la linea cellulare un modello essenziale per lo studio delle associazioni genetiche legate all'MHC.

La sequenza genomica dell'aplotipo COX è stata completamente caratterizzata nell'ambito del MHC Haplotype Project. Si estende per circa 4,8 Mb, comprendendo le regioni di classe I, II e III dell'MHC, nonché la regione estesa di classe I. Il sequenziamento dettagliato ha rivelato oltre 16.000 polimorfismi a singolo nucleotide (SNP) e numerose variazioni strutturali, fornendo approfondimenti sull'architettura genetica di questa regione. La caratterizzazione completa dell'MHC della linea cellulare COX la rende una risorsa fondamentale per la comprensione della funzione del sistema immunitario e delle basi genetiche delle malattie associate all'HLA.

Nella ricerca, la linea cellulare COX viene utilizzata per la mappatura fine dei loci associati alle malattie all'interno dell'MHC, nonché per studi funzionali sull'elaborazione e la presentazione dell'antigene. Il suo profilo genetico ben definito consente studi comparativi con altri aplotipi MHC, favorendo l'identificazione di varianti di rischio di malattia e di potenziali bersagli terapeutici. Inoltre, la linea cellulare è coinvolta nella valutazione di nuove tecnologie di sequenziamento e genotipizzazione, fungendo da riferimento standard negli studi immunogenetici.

Tessuto
Sangue periferico
Malattia
Linfoma di Burkitt
Sinonimi
  • LCL (DR3)

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Maschio
Proprietà di crescita
Sospensione
Livello di biosicurezza
2

03Caratteristiche

Morfologia
Celle rotonde
Tipo di cellula
Linfoblasto B

04Identificatori

Riferimento bibliografico
COX (numero di catalogo Cytion 302138)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_E534

05Espressione e suscettibilità

Virus
Trasformato da EBV

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
RPMI 1640, w: 2,0 mM di glutammina stabile, w: 2,0 g/L di NaHCO3 (articolo Cytion numero 820700a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS inattivato termicamente
Subcoltura
Omogeneizzare delicatamente la sospensione cellulare nel pallone pipettando verso l'alto e verso il basso, quindi prelevare un campione rappresentativo per determinare la densità cellulare per ml. Diluire la sospensione per ottenere una concentrazione cellulare di 1 x 105 cellule/ml con terreno di coltura fresco e aliquotare la sospensione regolata in nuovi palloni per l'ulteriore coltivazione.
Densità di semina
5 x 105 cellule/cm2
Recupero post-scongelamento
Dopo lo scongelamento, piastrare le cellule a 5 x 105 cellule/cm2 e lasciare che le cellule si riprendano dal processo di congelamento e aderiscano per almeno 24 ore.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
Età non specificata
Etnia
Caucasico