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IPEC-J2
Tessuto
Intestino tenue, digiuno
Malattia
Normale
Sinonimi
IPECJ2, Intestinal Porcine Epithelial Cell line-J2

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IPEC-J2

Cell line · Codice prodotto 305571

La linea cellulare IPEC-J2 è una linea cellulare epiteliale permanente non trasformata, derivata dall'epitelio del digiuno di un maialino neonato non allattato. La linea cellulare IPEC-J2...

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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare IPEC-J2 è una linea cellulare epiteliale permanente e non trasformata, derivata dall’epitelio del digiuno di un maialino neonato non allattato. Le cellule IPEC-J2 mantengono le caratteristiche strutturali e funzionali degli enterociti maturi, il che le rende un eccellente modello per lo studio della fisiologia e della patologia intestinale. Queste cellule formano un monostrato polarizzato con giunzioni strette e presentano un’elevata resistenza elettrica transepiteliale (TEER), essenziale per lo studio delle funzioni di barriera epiteliale e della permeabilità. Grazie alla loro origine suina, le cellule IPEC-J2 riproducono in modo più fedele la fisiologia intestinale umana rispetto alle linee derivate dai roditori, come IEC-6 e IEC-18, il che ne accresce la rilevanza nella ricerca zoonotica e comparativa.

Dal punto di vista funzionale, le cellule IPEC-J2 esprimono marcatori chiave e citochine associate alle risposte immunitarie, quali il TNF-α e il GM-CSF, e possiedono una serie di recettori toll-like (TLR) che facilitano gli studi sulle interazioni tra agenti patogeni e ospite. Ciò le ha rese preziose per la ricerca microbiologica, in particolare nell’esame delle interazioni con agenti patogeni come la *Salmonella enterica* e l’*Escherichia coli* patogena. Sono state inoltre impiegate per valutare gli effetti dei probiotici e degli integratori alimentari sulla salute intestinale, con applicazioni che includono la valutazione delle risposte antinfiammatorie e citoprotettive.

La ricerca che ha coinvolto le cellule IPEC-J2 ha esplorato le loro risposte allo stress ossidativo e i loro meccanismi protettivi. Ad esempio, è stato dimostrato che il glutatione (GSH) esogeno protegge le cellule IPEC-J2 dal danno ossidativo potenziando la funzione mitocondriale, migliorando il potenziale di membrana mitocondriale e riducendo l’accumulo di specie reattive dell’ossigeno (ROS). Questi risultati sottolineano l’utilità delle cellule IPEC-J2 nello studio delle risposte epiteliali allo stress e dei potenziali interventi terapeutici per il mantenimento dell’integrità della barriera intestinale.

Tessuto
Intestino tenue, digiuno
Malattia
Normale
Sinonimi
  • IPECJ2
  • Intestinal Porcine Epithelial Cell line-J2

02Classificazione

Organismo
Maiale
Sesso
Non specificato
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Simile all'epitelio
Tipo di cellula
Enterocita

04Identificatori

Riferimento bibliografico
IPEC-J2 (codice catalogo Cytion 305571)
Codice fiscale NCBI
9823
Cellosaurus
CVCL_2246

05Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM, w: 4,5 g/L di glucosio, w: 4 mM di L-Glutammina, w: 3,7 g/L di NaHCO3, w: 1,0 mM di piruvato di sodio (articolo Cytion numero 820300a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con TrypLE Express, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
1-3*10^4/cm²
Rinnovo dei fluidi
da 1 a 2 volte alla settimana
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

07Donatore

Età dei donatori
Neonato