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IPEC-J2
Tecido
Intestino delgado, jejuno
Doença
Normal
Sinónimos
IPECJ2, Intestinal Porcine Epithelial Cell line-J2

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IPEC-J2

Cell line · Número do produto 305571

A linha celular IPEC-J2 é uma linha celular epitelial permanente, não transformada, derivada do epitélio do jejuno de um leitão recém-nascido que não tinha sido amamentado. A linha celular IPEC-J2...

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01Informações gerais

Descrição

A linha celular IPEC-J2 é uma linha celular epitelial permanente, não transformada, derivada do epitélio jejunal de um leitão recém-nascido que não foi amamentado. As células IPEC-J2 mantêm as características estruturais e funcionais dos enterócitos maduros, tornando-as um excelente modelo para o estudo da fisiologia e da patologia intestinal. Estas células formam uma monocamada polarizada com junções apertadas e apresentam uma elevada resistência elétrica transepitelial (TEER), o que é essencial para investigar as funções de barreira epitelial e a permeabilidade. Devido à sua origem suína, as células IPEC-J2 imitam mais fielmente a fisiologia intestinal humana em comparação com linhas derivadas de roedores, como a IEC-6 e a IEC-18, o que reforça a sua relevância na investigação zoonótica e comparativa.

Do ponto de vista funcional, as células IPEC-J2 expressam marcadores-chave e citocinas associadas a respostas imunitárias, tais como o TNF-α e o GM-CSF, e possuem uma variedade de recetores toll-like (TLRs) que facilitam os estudos sobre as interações entre patógenos e hospedeiros. Isto tornou-as inestimáveis para a investigação microbiológica, particularmente na análise de interações com agentes patogénicos como a *Salmonella enterica* e a *Escherichia coli* patogénica. Também têm sido utilizadas para avaliar os efeitos de probióticos e suplementos alimentares na saúde intestinal, com aplicações que incluem a avaliação de respostas anti-inflamatórias e citoprotetoras.

A investigação envolvendo as células IPEC-J2 tem explorado as suas respostas ao stress oxidativo e os seus mecanismos de proteção. Por exemplo, demonstrou-se que a glutationa (GSH) exógena protege as células IPEC-J2 dos danos oxidativos, ao potenciar a função mitocondrial, melhorar o potencial da membrana mitocondrial e reduzir a acumulação de espécies reativas de oxigénio (ROS). Estas descobertas sublinham a utilidade das células IPEC-J2 no estudo das respostas epiteliais ao stress e de potenciais intervenções terapêuticas para manter a integridade da barreira intestinal.

Tecido
Intestino delgado, jejuno
Doença
Normal
Sinónimos
  • IPECJ2
  • Intestinal Porcine Epithelial Cell line-J2

02Classificação

Organismo
Porco
Sexo
Não especificado
Propriedades de crescimento
Aderente
Nível de biossegurança
1

03Características

Morfologia
De tipo epitelial
Tipo de célula
Enterócito

04Identificadores

Referência
IPEC-J2 (número de catálogo da Cytion 305571)
Número de identificação fiscal do NCBI
9823
Cellosaurus
CVCL_2246

05Manuseamento e cultura

Meio de cultura
DMEM, com: 4,5 g/L de glucose, com: 4 mM de L-Glutamina, com: 3,7 g/L de NaHCO3, com: 1,0 mM de piruvato de sódio (número de artigo Cytion 820300a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Completar o meio com 10% de FBS
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Para frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e, para frascos T75, utilizar 5-10 ml. De seguida, cobrir completamente as células com TrypLE Express, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Densidade de sementeira
1-3*10⁴/cm²
Renovação de fluidos
1 a 2 vezes por semana
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

07Doador

Idade do dador
Recém-nascido