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Cellule LNCaP
Tessuto
Prostata
Malattia
Carcinoma
Sito metastatico
Linfonodo sopraclaveare sinistro
Sinonimi
LNCAP, LNCap, Ln-Cap, Lymph Node Carcinoma of the prostate

Documenti

Cellule LNCaP

Cell line · Codice prodotto 300265

Le cellule LNCaP, derivate da una lesione metastatica in un linfonodo di un paziente affetto da cancro alla prostata, rappresentano uno strumento fondamentale nella ricerca sul cancro alla prostata, in particolar...

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01Informazioni generali

Descrizione

Le cellule LNCaP, derivate da una lesione metastatica in un linfonodo di un paziente affetto da cancro alla prostata, rappresentano uno strumento fondamentale nella ricerca sul cancro alla prostata, in particolare per studiare il ruolo degli androgeni e delle dinamiche del recettore degli androgeni (AR) nella progressione del cancro. La linea cellulare LNCaP è caratterizzata da una crescita sensibile agli androgeni e offre una finestra sui meccanismi alla base della risposta del cancro alla prostata alla manipolazione ormonale.

Come modello di carcinoma prostatico metastatico, le cellule LNCaP parentali e le loro sottoline, come il clone LNCaP FGC, forniscono indicazioni clinicamente rilevanti sulla progressione della malattia, soprattutto nel contesto delle metastasi all'osso, formando lesioni osteoblastiche simili a quelle osservate nel carcinoma prostatico umano.

La linea cellulare di carcinoma prostatico umano LNCaP esprime una forma mutata del gene AR con una più ampia specificità di legame agli steroidi ed è quindi fondamentale per comprendere la complessa interazione tra l'attività dell'AR e la progressione del cancro alla prostata. Ciò include l'esame dei bersagli a valle dell'AR, come PSA e NKx3.1, che sono cruciali per la funzione delle cellule epiteliali prostatiche. Le cellule LNCaP sono inoltre utilizzate per studi di citotossicità, come quelli indotti dalla ripl o dai potenziali effetti terapeutici di composti come l'amigdalina, nell'ambito delle strategie di somministrazione intracellulare di farmaci.

In sintesi, la linea cellulare di carcinoma prostatico umano LNCaP funge da pietra miliare per la comprensione del ruolo degli androgeni nella progressione del cancro e nel carcinoma prostatico, offrendo approfondimenti sui tumori ormono-responsivi, sulle sfide del carcinoma prostatico resistente e sul potenziale degli interventi terapeutici. La linea cellulare LNCaP è considerata una delle linee cellulari classiche e più utilizzate per il cancro alla prostata umano, insieme alle cellule DU145 e PC3.

Tessuto
Prostata
Malattia
Carcinoma
Sito metastatico
Linfonodo sopraclaveare sinistro
Sinonimi
  • LNCAP
  • LNCap
  • Ln-Cap
  • Lymph Node Carcinoma of the prostate

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Maschio
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Simile all'epitelio
Tumorigenico
Sì, in topi nudi
Cariotipo
Maschio pseudodiploide, sette cromosomi marcatori, numero modale = 46, intervallo = 33 - 91
Tempo di raddoppio
60 ore

04Identificatori

Riferimento bibliografico
LNCaP (numero di catalogo Cytion 300265)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_0395

05Espressione e suscettibilità

Recettori espressi
Androgeni, estrogeni
Espressione proteica
P53 positivo
Prodotti
Fosfatasi acida prostatica umana, antigene specifico della prostata

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
RPMI 1640, w: 2,0 mM di glutammina stabile, w: 2,0 g/L di NaHCO3 (articolo Cytion numero 820700a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS inattivato termicamente
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
Da 1 a 2 x 104 cellule/cm2
Rinnovo dei fluidi
Ogni 3 giorni
Recupero post-scongelamento
Dopo lo scongelamento, piastrare le cellule a 5 x 104 cellule/cm2 e lasciare che le cellule si riprendano dal processo di congelamento e aderiscano per almeno 24 ore.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
50 anni
Etnia
Caucasico