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Cellule DU-145
Tessuto
Prostata
Malattia
Carcinoma
Sito metastatico
Cervello
Sinonimi
DU145, Du-145, DU 145, DU_145, DU.145, Duke University 145

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Cellule DU-145

Cell line · Codice prodotto 300168

La DU145 è una linea cellulare di carcinoma prostatico umano con morfologia epiteliale, comunemente utilizzata nella ricerca sul carcinoma prostatico. La linea cellulare è stata ottenuta dal brai...

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01Informazioni generali

Descrizione

DU145 è una cellula umana di cancro alla prostata con morfologia epiteliale comunemente utilizzata nella ricerca sul cancro alla prostata. La linea cellulare è stata ottenuta dal cervello di un uomo di 69 anni affetto da cancro alla prostata. Esprimono recettori per gli androgeni e sono considerate tumorigeniche con un moderato potenziale metastatico, formando un adenocarcinoma (grado II) coerente con il primitivo prostatico quando iniettato in topi nudi.

In termini di cariotipo, le cellule DU145 sono ipotriploidi e presentano diversi cromosomi marcatori, tra cui t(11q12q), del(11)(q23), 16q+, del(9)(p11), del(1)(p32). Esprimono diversi isoenzimi, tra cui AK-1, ES-D, G6PD, GLO-I, Me-2, PGM1 e PGM3. Tuttavia, le cellule non esprimono l'antigene prostatico.

Le cellule DU145 sono debolmente positive alla fosfatasi acida e sono in grado di formare colonie in agar morbido. Le analisi ultrastrutturali hanno evidenziato la presenza di microvilli, tonofilamenti, desmosomi, mitocondri, Golgi ben sviluppato e lisosomi eterogenei. Le cellule DU145 hanno un tempo di raddoppiamento di circa 30-40 ore e sono adatte alla trasfezione.

Le cellule DU145 sono uno strumento prezioso nella ricerca terapeutica del cancro alla prostata. Insieme alle linee cellulari PC3 e LNCaP, DU145 è una linea cellulare standard di cancro alla prostata utilizzata nella ricerca medica. Insieme alle cellule PC-3, le cellule DU-145 esprimono le proteine del recettore degli androgeni. Tuttavia, quando sono state trattate con un ligando androgeno, le cellule non hanno mostrato una stimolazione dell'attività di un gene reporter AR-responsivo. Pertanto, queste cellule sono considerate non responsive agli androgeni.

Tessuto
Prostata
Malattia
Carcinoma
Sito metastatico
Cervello
Sinonimi
  • DU145
  • Du-145
  • DU 145
  • DU_145
  • DU.145
  • Duke University 145

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Maschio
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Simile all'epitelio
Tumorigenico
Forma adenocarcinoma (grado II) coerente con il primitivo prostatico
Cariotipo
(P75) da ipotriploide a tetraploide con anomalie che includono rotture, dicentri, minuti e un grande marcatore telocentrico

04Identificatori

Riferimento bibliografico
DU-145 (numero di catalogo Cytion 300168)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_0105

05Espressione e suscettibilità

Espressione dell'antigene
Gruppo sanguigno O, Rh+
Isoenzimi
Me-2, 1-2, PGM3, 2, PGM1, 1, ES-D, 1, AK-1, 1, G6PD, B, GLO-1, 2, Prodotto di frequenza del fenotipo: 0.0041

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamina, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (articolo Cytion numero 820100a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS e l'1% di NEAA
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
2 x 104 cellule/cm2 produrranno uno strato confluente in circa 4 giorni
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Recupero post-scongelamento
Dopo lo scongelamento, lasciare che le cellule si riprendano dal processo di congelamento per almeno 24 ore.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
69 anni