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SK-MEL-29.1
Tessuto
La pelle
Malattia
Melanoma

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SK-MEL-29.1

Cell line · Codice prodotto 300429

SK-MEL-29.1 è una linea cellulare di melanoma che è stata ampiamente studiata per le sue interazioni con il sistema immunitario, in particolare nel contesto della citotossicità...

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01Informazioni generali

Descrizione

SK-MEL-29.1 è una linea cellulare di melanoma che è stata ampiamente studiata per le sue interazioni con il sistema immunitario, in particolare nel contesto del riconoscimento dei linfociti T citotossici (CTL). Questo sottoclone della linea di melanoma SK-MEL-29 è stato utilizzato nella ricerca immunologica per definire gli antigeni specifici riconosciuti dai CTL autologhi. Questi CTL colpiscono selettivamente le cellule di melanoma che esprimono determinati antigeni, risparmiando le cellule non cancerose. Negli esperimenti di immunoselezione, si è scoperto che SK-MEL-29.1 esprime antigeni stabili importanti per la lisi specifica delle cellule di melanoma da parte dei CTL, fornendo indicazioni sull'immunogenicità del tumore e sull'evasione immunitaria.

Uno degli studi principali che ha coinvolto SK-MEL-29.1 ha dimostrato la sua utilità nella ricerca sull'immunoterapia del cancro. È stato dimostrato che i cloni CTL derivati da pazienti AV sono in grado di colpire efficacemente le cellule SK-MEL-29.1, che esprimono contemporaneamente più antigeni. Ciò rende SK-MEL-29.1 un modello importante per comprendere come le risposte immunitarie possano essere adattate per colpire antigeni specifici nel melanoma. La capacità di questi cloni CTL di identificare e lisare le cellule di melanoma fornisce informazioni preziose per lo sviluppo di strategie immunoterapeutiche, compresa la possibilità di generare vaccini antitumorali personalizzati.

Inoltre, le cellule SK-MEL-29.1 sono state testate anche nello sviluppo di vaccini antitumorali basati su virus. L'infezione con il virus della malattia di Newcastle (NDV), un virus con proprietà oncolitiche e immunostimolanti, ha dimostrato che le cellule SK-MEL-29.1 possono essere efficacemente infettate da NDV anche dopo l'irradiazione gamma, rendendole un candidato adatto per lo sviluppo di vaccini antitumorali vivi. Questa infezione aumenta l'immunogenicità delle cellule tumorali, portando a una risposta immunitaria antitumorale più robusta, a ulteriore sostegno dell'uso di SK-MEL-29.1 nella ricerca sui vaccini.

Tessuto
La pelle
Malattia
Melanoma

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Maschio
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Epiteliale

04Identificatori

Riferimento bibliografico
SK-MEL-29.1 (numero di catalogo Cytion 300429)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_IY54

05Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM, w: 4,5 g/L di glucosio, w: 4 mM di L-Glutammina, w: 3,7 g/L di NaHCO3, w: 1,0 mM di piruvato di sodio (articolo Cytion numero 820300a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

07Donatore

Età dei donatori
19 anni