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SK-BR-3
Tessuto
Seno, ghiandola mammaria
Malattia
Carcinoma duttale invasivo
Sito metastatico
Versamento pleurico
Sinonimi
SK-Br-3, Sk-Br-3, SK BR 03, SKBR-3, SKBr-3, SK-BR3, SKBr3, SkBr3, SKBR3

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SK-BR-3

Cell line · Codice prodotto 300333

SK-BR-3 cells are a human breast cancer cell line isolated from the pleural effusion of a 43-year-old female patient with metastatic breast cancer. SKBR3 ...

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01Informazioni generali

Descrizione

Le cellule SK-BR-3 sono una linea cellulare umana di cancro al seno isolata dal versamento pleurico di una paziente di 43 anni con cancro al seno metastatico. Le cellule SKBR3 sono state create all'inizio degli anni '70 e sono note per la loro sovraespressione del recettore 2 del fattore di crescita epidermico umano (HER2), un recettore tirosin-chinasi che svolge un ruolo critico nella patogenesi e nella progressione di alcuni tipi di cancro al seno.

La linea cellulare è caratterizzata da aberrazioni genetiche comuni nel cancro al seno, tra cui l'amplificazione del gene HER2 e mutazioni nel gene soppressore del tumore p53. La sovraespressione di HER2 nelle cellule SK-BR-3 le rende un modello prezioso per lo studio del cancro al seno HER2-positivo, caratterizzato da una crescita aggressiva e da una prognosi infausta, e per le terapie mirate a HER2. Le cellule SK-BR-3 sono state fondamentali per lo studio di trastuzumab (Herceptin), un anticorpo monoclonale contro HER2 che è diventato una pietra miliare nel trattamento del cancro al seno HER2-positivo.

Le cellule SK-BR-3 presentano un robusto tasso di crescita in vitro e sono state utilizzate in diversi setup sperimentali, tra cui studi sulla segnalazione cellulare, la resistenza ai farmaci, l'apoptosi e il ciclo cellulare del cancro. Queste cellule sono anche una risorsa fondamentale per la produzione di anticorpi monoclonali e per la ricerca sulla risposta immunitaria alle cellule del cancro al seno.

In sintesi, la linea cellulare SK-BR-3 è uno strumento indispensabile per la ricerca sul cancro al seno, in quanto offre profonde conoscenze sulla biologia dei tumori HER2-positivi e facilita lo sviluppo di terapie mirate che hanno migliorato significativamente le prospettive per le pazienti affette da questa difficile forma di cancro.

Tessuto
Seno, ghiandola mammaria
Malattia
Carcinoma duttale invasivo
Sito metastatico
Versamento pleurico
Sinonimi
  • SK-Br-3
  • Sk-Br-3
  • SK BR 03
  • SKBR-3
  • SKBr-3
  • SK-BR3
  • SKBr3
  • SkBr3
  • SKBR3

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Simile all'epitelio
Tumorigenico
Sì, in topi nudi, forma un adenocarcinoma scarsamente differenziato
Cariotipo
(P9) da ipertriploide a ipotetraploide (+A, +B, +C, +E, +F, +G, -D) con anomalie che includono dicentrici, frammenti acrocentrici, anelli, restringimenti secondari, grandi metacentrici o policentrici e grandi marcatori submetacentrici
Tempo di raddoppio
30 ore

04Identificatori

Riferimento bibliografico
SK-BR-3 (numero di catalogo Cytion 300333)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_0033

05Espressione e suscettibilità

Espressione proteica
P53 positivo
Espressione dell'antigene
Gruppo sanguigno A, Rh+, HLA A11, Bw22(+/-), B40, B18
Isoenzimi
PGM3, 1, PGM1, 1-2, ES-D, 1, AK-1, 1-2, GLO-1, 2, G6PD, B, Prodotto di frequenza del fenotipo: 0.0044
Profilo mutazionale
TP53 mut

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
McCoys 5a, w: 3,0 g/L Glucosio, w: Glutammina stabile, w: 2,0 mM Sodio piruvato, w: 2,2 g/L NaHCO3 (articolo Cytion numero 820200a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
Avviare la coltura dalla crioviala a 3 x 104 cellule/cm2. Utilizzare 2 x 104 cellule/cm2 per le subcolture successive.
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Recupero post-scongelamento
Dopo lo scongelamento, piastrare le cellule a 5 x 104 cellule/cm2 e lasciare che le cellule si riprendano dal processo di congelamento e aderiscano per almeno 24 ore.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
43 anni
Etnia
Caucasico