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Linea cellulare LoVo
Tessuto
Colon, grado IV, tipo Dukes C
Malattia
Adenocarcinoma
Sito metastatico
Linfonodo sopraclaveare sinistro
Sinonimi
LOVO

Documenti

Linea cellulare LoVo

Cell line · Codice prodotto 300266

La linea cellulare LOVO, derivata da un adenocarcinoma del colon di tipo C, grado IV secondo la classificazione di Dukes, è caratterizzata da mutazioni nel gene della poliposi adenomatosa coli (APC)...

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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare LOVO, derivata da un adenocarcinoma del colon di tipo C Dukes di grado IV, è caratterizzata da mutazioni nel gene della poliposi adenomatosa (APC), nell'oncogene virale del sarcoma del ratto Kirsten (KRAS) e nella proteina tumorale p53 (TP53). Queste caratteristiche genetiche sono fondamentali per studiare le basi molecolari della progressione del cancro colorettale, delle metastasi e dei meccanismi di resistenza ai farmaci.

Le cellule LoVo sono un modello fondamentale per lo screening dei composti antitumorali e, comprendendo come le cellule tumorali come LoVo sviluppano la resistenza, i ricercatori possono progettare terapie più efficaci. Le cellule LoVo sono anche impiegate in studi di biologia molecolare per esplorare le vie di segnalazione che regolano la crescita, la sopravvivenza e la metastasi delle cellule tumorali.

Nel contesto delle linee cellulari umane di cancro del colon e del colon-retto, le cellule LoVo offrono approfondimenti sui meccanismi di crescita del tumore e sul processo di metastasi, in particolare di metastasi ai linfonodi, e sul microambiente tumorale che guida la progressione del cancro. L'uso di cellule LoVo per il cancro del colon, soprattutto in modelli di xenotrapianto, consente ai ricercatori di studiare le dinamiche delle cellule tumorali e il potenziale metastatico.

Il sequenziamento profondo e l'analisi dell'espressione genica nelle cellule LoVo hanno fatto luce sui geni specifici e sul loro ruolo nelle cellule del cancro del colon-retto. Questa ricerca ha evidenziato l'importanza delle integrine, come l'integrina β1, nella migrazione e nell'invasione delle cellule tumorali e la regolazione di molecole chiave come la MMP2 nelle vie di segnalazione che contribuiscono alla comprensione delle proprietà invasive delle linee cellulari tumorali.

Le cellule LoVo, come sistema modello per le linee cellulari del cancro del colon-retto, svolgono un ruolo fondamentale nella comprensione degli aspetti molecolari del cancro, dall'espressione genica e proteica alle complessità della crescita tumorale e delle metastasi.

Tessuto
Colon, grado IV, tipo Dukes C
Malattia
Adenocarcinoma
Sito metastatico
Linfonodo sopraclaveare sinistro
Sinonimi
  • LOVO

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Maschio
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Simile all'epitelio
Tumorigenico
Sì, in topi nudi

04Identificatori

Riferimento bibliografico
LoVo (numero di catalogo Cytion 300266)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_0399

05Espressione e suscettibilità

Espressione dell'antigene
HLA A11, B15, B17, Cw1, Cw3, gruppo sanguigno B
Isoenzimi
G6PD, B, PGM1, 2, PGM3, 1-2, 6PGD, A, ES-D, 1
Oncogeni
Myc +, myb + , ras +, fos +, p53 +, sis -, abl -, ros -, src -
Profilo mutazionale
Le cellule LOVO portano una mutazione nel codone 13 del gene Kras: GGC(Wt Gly) >GAC(Asp)
Trascriptasi inversa
Negativo
Prodotti
Antigene carcinoembrionale (CEA) 908 ng/106 cellule/10 giorni

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
Ham's F12K Medium, w: 2,0 mM L-Glutammina, w: 2,0 mM Sodio piruvato, w: 2,5 g/L NaHCO3 (articolo Cytion numero 820608a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
1 x 104 cellule/cm2
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Recupero post-scongelamento
Dopo lo scongelamento, piastrare le cellule a 5 x 104 cellule/cm2 e lasciare che le cellule si riprendano dal processo di congelamento e aderiscano per almeno 24 ore.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
56 anni