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A7r5
Tessuto
Aorta, toracica, muscolo liscio
Sinonimi
A7R5

Documenti

A7r5

Cell line · Codice prodotto 305198

Derived from the smooth muscle of the embryonic thoracic aorta in a BDIx rat, the A7r5 cell line is extensively employed in cardiovascular research. These...

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01Informazioni generali

Descrizione

Derivata dal muscolo liscio dell'aorta toracica embrionale di un ratto BDIx, la linea cellulare A7r5 è ampiamente utilizzata nella ricerca cardiovascolare. Queste cellule simili a fibroblasti mostrano una morfologia unica, simile a un nastro piatto, che si trasforma in matrici parallele di cellule a forma di fuso durante la differenziazione. Questo distinto adattamento strutturale facilita lo studio della dinamica e della morfologia cellulare in varie condizioni fisiologiche. Durante la fase stazionaria del loro ciclo di crescita, le cellule A7r5 mostrano un aumento significativo delle attività della miochinasi e della creatina fosfochinasi (CPK), enzimi fondamentali per il trasferimento di energia e il metabolismo cellulare.

La sintesi di uno specifico isoenzima CPK di tipo muscolare alla cessazione della divisione cellulare nelle cellule A7r5 fornisce un modello prezioso per studiare i meccanismi molecolari alla base dello sviluppo e del differenziamento muscolare. Questa linea cellulare è stata fondamentale per esplorare gli effetti dell'angiotensina II sullo stress ossidativo vascolare, offrendo spunti per capire come questo ormone influenzi la fisiologia cardiovascolare. Inoltre, le cellule A7r5 sono state utilizzate per studiare gli effetti inibitori della fosfolipasi A2 (PLA2) sulla formazione di gocce lipidiche, evidenziando ulteriormente la loro utilità nella ricerca cardiovascolare. Queste applicazioni sottolineano la versatilità della linea cellulare A7r5 e il suo ruolo centrale nella delucidazione di percorsi critici e potenziali bersagli terapeutici negli studi sulle malattie cardiovascolari.

Tessuto
Aorta, toracica, muscolo liscio
Sinonimi
  • A7R5

02Classificazione

Organismo
Ratto
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Fibroblasti

04Identificatori

Riferimento bibliografico
A7r5 (numero di catalogo Cytion 305198)
Codice fiscale NCBI
10116
Cellosaurus
CVCL_0137

05Espressione e suscettibilità

Espressione proteica
Miochinasi, Creatina Fosfochinasi (isoenzima muscolare), Miosina

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM, w: 4,5 g/L di glucosio, w: 4 mM di L-Glutammina, w: 3,7 g/L di NaHCO3, w: 1,0 mM di piruvato di sodio (articolo Cytion numero 820300a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Razza / sottospecie
BDIx
Età dei donatori
Embrione