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CERV-215
Tessuto
Cervice
Malattia
Carcinoma
Sinonimi
Cerv-215, MRI-H-215, MRI-H215

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CERV-215

Cell line · Codice prodotto 300292

The CERV-215 cell line, established by Dr. Bodgen at the Mason Research Institute, originates from a primary xenotransplant termed MRI-H215, which has bee...

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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare CERV-215, creata dal Dr. Bodgen presso il Mason Research Institute, proviene da uno xenotrapianto primario denominato MRI-H215, che è stato adattato per il trapianto in vivo.

Questa linea cellulare rappresenta una forma aggressiva di carcinoma epidermoide, classificato come invasivo, a grandi cellule, non cheratinizzante e scarsamente differenziato.

La linea cellulare Cerv-215 è una risorsa fondamentale per la ricerca sul cancro, in particolare per lo studio delle alterazioni genetiche e del loro ruolo nella carcinogenesi cervicale. Questa linea cellulare è caratterizzata da modifiche genetiche uniche nel gene Smad4, in cui specifici esoni sono sostituiti da sequenze provenienti da altre regioni genomiche, portando all'espressione di proteine Smad4 tronche e probabilmente non funzionali. Queste alterazioni forniscono indicazioni sulle proprietà oncogeniche della linea cellulare e sui meccanismi molecolari alla base del cancro cervicale.

In particolare, la MRI-215 è positiva all'HPV45, ma le sue alterazioni del gene Smad4 sono indipendenti dall'integrazione dell'HPV, suggerendo una complessa interazione di fattori genetici che contribuiscono allo sviluppo del cancro al di là delle influenze virali. Questa linea cellulare è uno strumento prezioso per i ricercatori che si concentrano sugli aspetti genetici del cancro, sul ruolo di Smad4 nella progressione tumorale e sull'interazione tra papillomavirus umano e meccanismi cellulari dell'ospite.

MRI-H215 offre una piattaforma unica per esplorare le complessità del cancro cervicale a livello molecolare, rendendola una componente essenziale dei laboratori di ricerca sul cancro che mirano a scoprire nuovi bersagli terapeutici e a comprendere le basi genetiche della tumorigenesi.

Tessuto
Cervice
Malattia
Carcinoma
Sinonimi
  • Cerv-215
  • MRI-H-215
  • MRI-H215

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
2

03Caratteristiche

Morfologia
Simile all'epitelio
Tipo di cellula
Epidermoide
Tumorigenico
Sì, in topi nudi

04Identificatori

Riferimento bibliografico
CERV-215 (numero di catalogo Cytion 300292)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_5722

05Espressione e suscettibilità

Virus
HPV-16 negativo
Prodotti
Citocheratina 8, 18, vimentina

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamina, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (articolo Cytion numero 820100a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS e l'1% di NEAA
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
Si consiglia 1 x 104 cellule/cm2
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Recupero post-scongelamento
Dopo lo scongelamento, piastrare le cellule a 5 x 104 cellule/cm2 e lasciare che le cellule si riprendano dal processo di congelamento e aderiscano per almeno 24 ore.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
39 anni
Etnia
Africano