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CERV-215
Tecido
Colo do útero
Doença
Carcinoma
Sinónimos
Cerv-215, MRI-H-215, MRI-H215

Documentos

CERV-215

Cell line · Número do produto 300292

The CERV-215 cell line, established by Dr. Bodgen at the Mason Research Institute, originates from a primary xenotransplant termed MRI-H215, which has bee...

€800.00sem impostos nem portes de envio

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01Informações gerais

Descrição

A linha celular CERV-215, criada pelo Dr. Bodgen no Mason Research Institute, tem origem num xenotransplante primário denominado MRI-H215, que foi adaptado para transplante in vivo.

Esta linha celular representa uma forma agressiva de carcinoma epidermoide, classificado como invasivo, de células grandes, não queratinizante e pouco diferenciado.

A linha celular Cerv-215 é um recurso fundamental para a investigação do cancro, especialmente no estudo das alterações genéticas e do seu papel na carcinogénese do colo do útero. Esta linha celular é caracterizada por modificações genéticas únicas no gene Smad4, em que exões específicos são substituídos por sequências de outras regiões genómicas, levando à expressão de proteínas Smad4 truncadas e provavelmente não funcionais. Estas alterações permitem compreender as propriedades oncogénicas da linha celular e os mecanismos moleculares subjacentes ao cancro do colo do útero.

De notar que a MRI-215 é positiva para o HPV45, mas as suas alterações do gene Smad4 são independentes da integração do HPV, o que sugere uma interação complexa de factores genéticos que contribuem para o desenvolvimento do cancro, para além das influências virais. Esta linha celular constitui uma ferramenta inestimável para os investigadores que se debruçam sobre os aspectos genéticos do cancro, o papel do Smad4 na progressão do tumor e a interação entre o papilomavírus humano e os mecanismos celulares do hospedeiro.

A MRI-H215 oferece uma plataforma única para explorar os meandros do cancro do colo do útero a nível molecular, tornando-a uma componente essencial dos laboratórios de investigação do cancro que pretendem descobrir novos alvos terapêuticos e compreender a base genética da tumorigénese.

Tecido
Colo do útero
Doença
Carcinoma
Sinónimos
  • Cerv-215
  • MRI-H-215
  • MRI-H215

02Classificação

Organismo
Humano
Sexo
Feminino
Propriedades de crescimento
Aderente
Nível de biossegurança
2

03Características

Morfologia
De tipo epitelial
Tipo de célula
Epidermoide
Tumorigénico
Sim, em ratinhos nus

04Identificadores

Referência
CERV-215 (número de catálogo Cytion 300292)
Número de identificação fiscal do NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_5722

05Expressão e suscetibilidade

Vírus
HPV-16 negativo
Produtos
Citoqueratina 8, 18, Vimentina

06Manuseamento e cultura

Meio de cultura
EMEM (MEM Eagle), com: 2 mM L-Glutamina, com: 2,2 g/L NaHCO3, com: EBSS (número de artigo Cytion 820100a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Completar o meio com 10% de FBS e 1% de NEAA
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Densidade de sementeira
Recomenda-se 1 x 104 células/cm2
Renovação de fluidos
2 a 3 vezes por semana
Recuperação após o descongelamento
Após o descongelamento, coloque as células em placas a uma densidade de 5 x 104 células/cm² e deixe-as recuperar do processo de congelamento e aderir durante pelo menos 24 horas.
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

08Doador

Idade do dador
39 anos
Etnia
Africano