Pereiti prie turinio
TCMK-1
Audinys
Inkstai
Liga
Normalus
Sinonimai
TCMK1, Transformed C3H Mouse Kidney-1

Dokumentai

TCMK-1

Cell line · Prekės numeris 305361

TCMK-1 is a mouse kidney epithelial cell line that was transformed using simian virus 40 (SV40). This cell line was established to study SV40-induced cell...

€540.00neįskaitant mokesčių ir pristatymo išlaidų

Pritaikymas / Rekomendacijos

Yra sandėlyje
Lot
Rekomenduojama (šviežiausia partija)
  • CoA
1

01Bendra informacija

Aprašymas

TCMK-1 – tai pelių inkstų epitelio ląstelių linija, transformuota naudojant beždžionių virusą 40 (SV40). Ši ląstelių linija buvo sukurta siekiant tirti SV40 sukeltą ląstelių transformaciją ir onkogenezę pelių inkstų audinyje. Transformacijos proceso rezultatas – ląstelės, pasižyminčios pakitusia morfologija, padidėjusiu proliferacijos pajėgumu ir gebėjimu išlaikyti nuolatinį augimą in vitro. TCMK-1 ląstelės pasižymi daugiausia epiteliniu fenotipu, jose pasitaiko keletas verpstės formos ląstelių ir daugiabrandžių milžiniškų ląstelių, kurios yra būdingos transformuotoms ląstelių linijoms.

Viena iš pagrindinių TCMK-1 savybių yra didžiojo SV40 T-antigeno buvimas, kuris sutrikdo normalią ląstelių ciklo reguliaciją, inaktyvuodamas naviko slopinančius baltymus, pvz., p53 ir RB. Šis mechanizmas skatina nekontroliuojamą ląstelių dalijimąsi ir padidina ląstelių išgyvenimą. Imunofluorescencijos tyrimai patvirtino SV40 specifinių antigenų ekspresiją TCMK-1 ląstelėse, suteikdami papildomų įrodymų apie virusu sukeltą transformaciją. Be to, nepaisant jų transformuoto pobūdžio, nebuvo pastebėta, kad šios ląstelės in vivo suformuotų navikus, kai buvo įšvirkštos į imunokompetentingas peles.

TCMK-1 buvo naudojamos tyrimuose, susijusiuose su virusine onkogeneze, inkstų ląstelių fiziologija ir ląstelių transformacijos mechanizmais. Dėl SV40 sukelto transformavimo jos yra naudingas modelis virusų ir šeimininko sąveikos bei su ląstelių nemirtingumu susijusių molekuliarių kelių tyrimams. Tačiau tyrėjai turėtų atsižvelgti į tai, kad SV40 T-antigeno buvimas gali paveikti normalias ląstelių funkcijas, o tai savo ruožtu gali turėti įtakos eksperimentų rezultatams.

Audinys
Inkstai
Liga
Normalus
Sinonimai
  • TCMK1
  • Transformed C3H Mouse Kidney-1

02Klasifikacija

Organizmas
Pele
Seksas
Nenurodyta
Augimo savybės
Prisijungęs
GMO statusas
GMO-S1
Išsami informacija apie GMO statusą
GMO-S1: This murine kidney-derived cell line (TCMK-1) contains an SV40 T-Antigen introduced by infection with SV40 strain 777, supporting transformed and sustained proliferation. The viral sequences are stably present. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biologinio saugumo lygis
1

03Charakteristikos

Morfologija
Epitelis
Tumorogeninis
Ne; Ne, pelėms su slopintu imunitetu; Taip, pusiau kietoje terpėje
Kariotipas
Modalinis skaičius = 78; intervalas = nuo 64 iki 157. Visose ląstelėse buvo po 2–6 akrocentrinių chromosomų su antriniais susiaurėjimais ir po 1–4 dvikrypčių chromosomų. Šešiasdešimt procentų ląstelių turėjo vieną ar daugiau labai mažų chromosomų.

04Identifikatoriai

Nuoroda
TCMK-1 (Cytion katalogo numeris 305361)
NCBI mokesčių identifikavimo kodas
10090
Cellosaurus
CVCL_2772

05Išraiška ir jautrumas

Antigeno ekspresija
H-2k
Virusai
SV40
Jautrumas virusams
Vezikulinis stomatitas, Glazgas (Indiana); 1-asis žmogaus poliomielito virusas

06Laikymas ir auginimas

Maitinamoji terpė
RPMI 1640, š: 2,0 mM stabilus glutaminas, š: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion gaminio numeris 820700a)
Inkubacijos aplinka

37 °C, 5 %CO2, drėkintoje atmosferoje.

Maisto papildai
Į terpę įpilkite 10 % FBS ir 10 mM HEPES, 2,5 g/l gliukozės, 1 mM natrio piruvato
Disociacijos reagentas
„Accutase“ 10 min. 37 °C temperatūroje
Subkultūrinis auginimas
Pašalinkite seną terpę nuo prilipusių ląstelių ir nuplaukite jas PBS, kuriame nėra kalcio ir magnio. T25 kolboms naudokite 3-5 ml PBS, o T75 kolboms - 5-10 ml. Tuomet visiškai užpilkite ląsteles "Accutase", naudodami 1-2 ml T25 kolboms ir 2,5 ml T75 kolboms. Leiskite ląstelėms inkubuotis kambario temperatūroje 8-10 minučių, kad jos atsiskirtų. Po inkubacijos atsargiai sumaišykite ląsteles su 10 ml terpės, kad jos vėl suspenduotų, tada 3 minutes centrifuguokite 300xg greičiu. Išmeskite supernatantą, vėl sutirpinkite ląsteles šviežioje terpėje ir perkelkite jas į naujas kolbas, kuriose jau yra šviežia terpė.
Skaidymo santykis
1–3
Sėjos tankis
2–4 x 104 ląstelės/cm2
Skysčių atnaujinimas
Kas 2-3 dienas
Atšildymas ir auginimas
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kokybės kontrolė ir kriokonservavimas

Sterilumas

Mikoplazmos užterštumas atmetamas taikant PGR pagrįstus tyrimus ir liuminescencinius mikoplazmos aptikimo metodus.

Siekiant užtikrinti, kad nebūtų užteršimo bakterijomis, grybeliais ar mielėmis, ląstelių kultūros kasdien vizualiai tikrinamos.

Šaldymo terpė
Kaip kriokonservavimo terpę naudojame visišką augimo terpę (įskaitant FBS) + 10 % DMSO, kad būtų užtikrintas tinkamas gyvybingumas po atšildymo, arba CM-1 (Cytion katalogo numeris 800100), kurioje yra optimizuotų osmoprotektorių ir medžiagų apykaitos stabilizatorių, kad būtų pagerintas atsigavimas ir sumažintas kriokonservavimo sukeltas stresas.
Laikymo sąlygos

Norėdami ilgai saugoti, įdėkite buteliukus į garų fazės skystą azotą maždaug -150-196 °C temperatūroje. Laikymas -80 °C temperatūroje yra priimtinas tik kaip trumpas tarpinis etapas prieš perkeliant į skystąjį azotą.

Pristatymo sąlygos

Kriokonservuotos ląstelių linijos gabenamos ant sauso ledo patvirtintoje, izoliuotoje pakuotėje su pakankamu kiekiu šaldymo skysčio, kad pervežimo metu būtų palaikoma maždaug -78 °C temperatūra. Gavę pakuotę, nedelsdami ją apžiūrėkite ir nedelsdami perkelkite mėgintuvėlius į tinkamą saugyklą.

08Donoras

Veislė / porūšis
C3H/Mai
Donoro amžius
1–2 mėnesiai