Pāriet uz saturu
TCMK-1
Audums
Nieres
Slimība
Parasts
Sinonīmi
TCMK1, Transformed C3H Mouse Kidney-1

Dokumenti

TCMK-1

Cell line · Preces numurs 305361

TCMK-1 is a mouse kidney epithelial cell line that was transformed using simian virus 40 (SV40). This cell line was established to study SV40-induced cell...

€540.00bez nodokļa un piegādes izmaksām

Pielāgošana / Ieteikumi

Noliktavā
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
  • CoA
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

TCMK-1 ir peles nieru epitēlija šūnu līnija, kas tika transformēta, izmantojot pērtiķu vīrusu 40 (SV40). Šī šūnu līnija tika izveidota, lai pētītu SV40 izraisīto šūnu transformāciju un onkogēnēzi peles nieru audos. Transformācijas procesa rezultātā radās šūnas ar izmainītu morfoloģiju, paaugstinātu proliferācijas spēju un spēju uzturēt nepārtrauktu augšanu in vitro. TCMK-1 šūnām ir galvenokārt epitēlija fenotips ar dažām vārpstveida šūnām un daudzkodolu milzu šūnām, kas ir transformētu šūnu līniju raksturīgas iezīmes.

Viena no galvenajām TCMK-1 īpašībām ir SV40 lielā T-antigēna klātbūtne, kam ir nozīme normālas šūnu cikla regulācijas traucējumos, inaktivējot audzēja supresoru proteīnus, piemēram, p53 un RB. Šis mehānisms veicina nekontrolētu šūnu dalīšanos un uzlabo šūnu izdzīvošanu. Imunofluorescences pētījumi ir apstiprinājuši SV40-specifisko antigēnu ekspresiju TCMK-1 šūnās, sniedzot papildu pierādījumus par vīrusu izraisītu transformāciju. Turklāt, neskatoties uz to transformēto dabu, nav novērots, ka šīs šūnas in vivo veidotu audzējus, kad tās tiek injicētas imūnkompetentām pelēm.

TCMK-1 ir izmantots pētījumos, kas saistīti ar vīrusu onkogēnēzi, nieru šūnu fizioloģiju un šūnu transformācijas mehānismiem. Pateicoties SV40 izraisītajai transformācijai, tas kalpo kā noderīgs modelis vīrusa un saimnieka mijiedarbības, kā arī ar šūnu nemirstības iegūšanu saistīto molekulāro ceļu izpētei. Tomēr pētniekiem jāņem vērā, ka SV40 T-antigēna klātbūtne var ietekmēt normālas šūnu funkcijas, kas savukārt var ietekmēt eksperimentu rezultātus.

Audums
Nieres
Slimība
Parasts
Sinonīmi
  • TCMK1
  • Transformed C3H Mouse Kidney-1

02Klasifikācija

Organisms
Pele
Sekss
Nav norādīts
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
ĢMO statuss
GMO-S1
Sīkāka informācija par ĢMO statusu
GMO-S1: This murine kidney-derived cell line (TCMK-1) contains an SV40 T-Antigen introduced by infection with SV40 strain 777, supporting transformed and sustained proliferation. The viral sequences are stably present. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Epitēlija
Tumorogēns
Nē; Nē, imūnsistēmas nomāktām pelēm; Jā, puscietā barotnē
Kariotips
Modālais skaits = 78; diapazons = no 64 līdz 157. Visās šūnās tika novērotas 2–6 akrocentriskas hromosomas ar sekundāriem sašaurinājumiem un 1–4 divzaru hromosomas katrā šūnā. Sešdesmit procentos šūnu bija viena vai vairākas sīkas hromosomas.

04Identifikatori

Atsauce
TCMK-1 (Cytion kataloga numurs 305361)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
10090
Cellosaurus
CVCL_2772

05Pazīmes un uzņēmība

Antigēna ekspresija
H-2k
Vīrusi
SV40
Jutība pret vīrusiem
Vezikulārais stomatīts, Glāzgova (Indiana); cilvēka poliomielīta vīruss Nr. 1

06Apstrāde un audzēšana

Barotne
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabils glutamīns, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion izstrādājuma numurs 820700a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildiniet barotni ar 10 % FBS un 10 mM HEPES, 2,5 g/l glikozes, 1 mM nātrija piruvātu
Disociācijas reaģents
Accutase 10 minūtes 37 °C temperatūrā
Pārstādīšana
Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
Sadalījuma attiecība
no 1 līdz 3
Sēšanas blīvums
2 līdz 4 x 104 šūnas/cm2
Šķidruma atjaunošana
Ik pēc 2 līdz 3 dienām
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

08Ziedotājs

Šķirne / pasuga
C3H/Mai
Donora vecums
1–2 mēneši