Ga naar de inhoud
TCMK-1
Weefsel
Nieren
Ziekte
Normaal
Synoniemen
TCMK1, Transformed C3H Mouse Kidney-1

Documenten

TCMK-1

Cell line · Productnummer 305361

TCMK-1 is a mouse kidney epithelial cell line that was transformed using simian virus 40 (SV40). This cell line was established to study SV40-induced cell...

€540.00excl. btw en verzendkosten

Maatwerk / Aanbevelingen

Op voorraad
Lot
Aanbevolen (verste partij)
  • CoA
1

01Algemene informatie

Beschrijving

TCMK-1 is een epitheelcellijn afkomstig uit de nier van een muis, die is getransformeerd met behulp van het simian virus 40 (SV40). Deze cellijn is opgezet om de door SV40 geïnduceerde cellulaire transformatie en oncogenese in nierweefsel van muizen te bestuderen. Het transformatieproces resulteerde in cellen met een veranderde morfologie, een verhoogd proliferatievermogen en het vermogen om in vitro continu te blijven groeien. TCMK-1-cellen vertonen een overwegend epitheliaal fenotype met enkele spindelvormige cellen en meerkernige reuzencellen, wat veelvoorkomende kenmerken zijn van getransformeerde cellijnen.

Een van de belangrijkste kenmerken van TCMK-1 is de aanwezigheid van het grote T-antigeen van SV40, dat een rol speelt bij het verstoren van de normale regulatie van de celcyclus door tumorsuppressoreiwitten zoals p53 en RB te inactiveren. Dit mechanisme bevordert ongecontroleerde celdeling en versterkt de overleving van de cellen. Immunofluorescentieonderzoeken hebben de expressie van SV40-specifieke antigenen in TCMK-1-cellen bevestigd, wat verder bewijs levert voor viraal-geïnduceerde transformatie. Bovendien is, ondanks hun getransformeerde aard, niet waargenomen dat deze cellen in vivo tumoren vormen wanneer ze worden geïnjecteerd in immuuncompetente muizen.

TCMK-1 is gebruikt in onderzoek naar virale oncogenese, de fysiologie van niercellen en mechanismen van cellulaire transformatie. Vanwege de SV40-transformatie dient het als een nuttig model voor het bestuderen van interacties tussen virus en gastheer en de moleculaire routes die verband houden met celimmortaliteit. Onderzoekers moeten er echter rekening mee houden dat de aanwezigheid van het SV40 T-antigeen de normale cellulaire functies kan beïnvloeden, wat van invloed kan zijn op de experimentele resultaten.

Weefsel
Nieren
Ziekte
Normaal
Synoniemen
  • TCMK1
  • Transformed C3H Mouse Kidney-1

02Classificatie

Organisme
Muis
Seks
Niet gespecificeerd
Groei-eigenschappen
Aanhanger
GGO-status
GMO-S1
Details over de GGO-status
GMO-S1: This murine kidney-derived cell line (TCMK-1) contains an SV40 T-Antigen introduced by infection with SV40 strain 777, supporting transformed and sustained proliferation. The viral sequences are stably present. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioveiligheidsniveau
1

03Kenmerken

Morfologie
Epitheel
Tumorverwekkend
Nee; Nee, bij immuungecompromitteerde muizen; Ja, in halfvast medium
Karyotype
Modaal aantal = 78; bereik = 64 tot 157. Alle cellen vertoonden 2-6 acrocentrische chromosomen met secundaire vernauwingen en 1-4 tweearmige chromosomen per cel. Zestig procent van de cellen had één of meer minuscule chromosomen.

04Identificatiegegevens

Bronvermelding
TCMK-1 (Cytion-catalogusnummer 305361)
NCBI-belastingnummer
10090
Cellosaurus
CVCL_2772

05Expressie en vatbaarheid

Antigeenexpressie
H-2k
Virussen
SV40
Gevoeligheid voor virussen
Vesiculaire stomatitis, Glasgow (Indiana); Menselijk poliovirus 1

06Behandeling en kweek

Kweekmedium
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiele Glutamine, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion artikelnummer 820700a)
Incubatieomgeving

37°C, 5%CO2, bevochtigde atmosfeer.

Supplementen
Voeg aan het medium 10% FBS en 10 mM HEPES, 2,5 g/l glucose en 1 mM natriumpyruvaat toe
Dissociatiereagens
Accutase 10 minuten bij 37 °C
Heruitplanten
Verwijder het oude medium van de adherente cellen en was ze met PBS zonder calcium en magnesium. Gebruik voor T25-flesjes 3-5 ml PBS en voor T75-flesjes 5-10 ml. Bedek de cellen vervolgens volledig met Accutase, met 1-2 ml voor T25-flesjes en 2,5 ml voor T75-flesjes. Laat de cellen gedurende 8-10 minuten bij kamertemperatuur incuberen om ze los te maken. Na incubatie de cellen voorzichtig mengen met 10 ml medium om ze te resuspenderen en vervolgens centrifugeren bij 300xg gedurende 3 minuten. Gooi het supernatant weg, resuspendeer de cellen in vers medium en breng ze over in nieuwe kolven die al vers medium bevatten.
Splitsingsverhouding
1 tot en met 3
Zaaidichtheid
2 tot 4 x 104 cellen/cm2
Vloeistofverversing
Om de 2 tot 3 dagen
Ontdooien en kweken
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kwaliteitscontrole en cryopreservatie

Onvruchtbaarheid

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.

Kweekmedium invriezen
Als cryoconserveringsmedium gebruiken we volledig groeimedium (inclusief FBS) + 10% DMSO voor voldoende levensvatbaarheid na het ontdooien, of CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100), dat geoptimaliseerde osmoprotectanten en metabolische stabilisatoren bevat om het herstel te verbeteren en door cryo geïnduceerde stress te verminderen.
Opslagvoorwaarden

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Verzendvoorwaarden

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.

08Donateur

Soort / ondersoort
C3H/Mai
Leeftijd van de donor
1-2 maanden