TCMK-1
Cell line · Product number 305361
TCMK-1 is a mouse kidney epithelial cell line that was transformed using simian virus 40 (SV40). This cell line was established to study SV40-induced cell...
Recommended (freshest lot)
01General information
- Description
TCMK-1 הוא קו תאים אפיתליאליים מכליות עכבר שעבר טרנספורמציה באמצעות נגיף הקופים 40 (SV40). קו תאים זה הוקם במטרה לחקור את הטרנספורמציה התאית ואת האונקוגנזה המושרות על ידי SV40 ברקמת הכליה של עכברים. תהליך השינוי הוביל לתאים בעלי מורפולוגיה שונה, יכולת התרבות מוגברת, ויכולת לשמור על צמיחה רציפה במבחנה. תאי TCMK-1 מציגים פנוטיפ אפיתליאלי בעיקר, עם מספר תאים בצורת ציר ותאים ענקיים רב-גרעיניים, שהם מאפיינים נפוצים של קווי תאים שעברו שינוי.
אחד המאפיינים המרכזיים של TCMK-1 הוא נוכחותו של האנטיגן T הגדול של SV40, אשר ממלא תפקיד בשיבוש הוויסות התקין של מחזור התא על ידי השבתת חלבוני מדכאי גידולים כגון p53 ו-RB. מנגנון זה מאפשר חלוקה תאית בלתי מבוקרת ומשפר את הישרדות התאים. מחקרי אימונופלואורסצנציה אישרו את הביטוי של אנטיגנים ספציפיים ל-SV40 בתאי TCMK-1, מה שמספק ראיות נוספות לשינוי גנטי הנגרם על ידי הנגיף. בנוסף, למרות אופיין המשתנה, לא נצפה כי תאים אלה יוצרים גידולים in vivo כאשר הוזרקו לעכברים בעלי מערכת חיסונית תקינה.
TCMK-1 שימש במחקרים העוסקים באונקוגנזה נגיפית, בפיזיולוגיה של תאי כליה ובמנגנוני טרנספורמציה תאית. בשל הטרנספורמציה הנגרמת על ידי SV40, הוא משמש מודל שימושי לחקר האינטראקציות בין הנגיף למאכסן והמסלולים המולקולריים הקשורים להפיכת התאים לבלתי-מתים. עם זאת, על החוקרים לקחת בחשבון כי נוכחותו של אנטיגן T של SV40 עשויה להשפיע על תפקודים תאיים נורמליים, דבר שעלול להשפיע על תוצאות הניסויים.
- Tissue
- כליה
- Disease
- רגיל
- Synonyms
- TCMK1
- Transformed C3H Mouse Kidney-1
02Classification
- Organism
- Mouse
- Sex
- Unspecified
- Growth properties
- Adherent
- GMO status
- GMO-S1
- GMO status details
- GMO-S1: This murine kidney-derived cell line (TCMK-1) contains an SV40 T-Antigen introduced by infection with SV40 strain 777, supporting transformed and sustained proliferation. The viral sequences are stably present. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
- Biosafety level
- 1
03Characteristics
- Morphology
- אפיתל
- Tumourigenic
- לא; לא, בעכברים עם דיכוי חיסוני; כן, במצע חצי-מוצק
- Karyotype
- המספר המודלי = 78; הטווח = 64 עד 157. בכל התאים נצפו 2–6 כרומוזומים אקרוצנטריים עם היצרויות משניות ו-1–4 כרומוזומים דו-זרועיים לכל תא. ב-60% מהתאים נצפה כרומוזום זעיר אחד או יותר.
04Identifiers
- Citation
- TCMK-1 (מספר קטלוג Cytion 305361)
- NCBI TaxID
- 10090
- Cellosaurus
- CVCL_2772
05Expression and susceptibility
- Antigen expression
- H-2k
- Viruses
- SV40
- Virus susceptibility
- דלקת הפה והלשון הבלוטית, גלזגו (אינדיאנה); נגיף הפוליו האנושי 1
06Handling and culture
- Culture medium
- RPMI 1640, w: 2.0 mM גלוטמין יציב, w: 2.0 g/L NaHCO3 (מספר קטלוגי של Cytion 820700a)
- Incubation atmosphere
37°C, 5%CO2, אווירה לחה.
- Supplements
- יש להוסיף למדיום 10% FBS ו-10 מ"מ HEPES, 2.5 גרם/ליטר גלוקוז, 1 מ"מ פירובט נתרן
- Dissociation reagent
- Accutase, 10 דקות בטמפרטורה של 37°C
- Subculturing
- הסר את המדיום הישן מהתאים הדבוקים ושטוף אותם ב-PBS ללא סידן ומגנזיום. עבור בקבוקי T25, השתמש ב-3-5 מ"ל PBS, ועבור בקבוקי T75, השתמש ב-5-10 מ"ל. לאחר מכן, כסה את התאים לחלוטין ב-Accutase, תוך שימוש ב-1-2 מ"ל עבור בקבוקי T25 ו-2.5 מ"ל עבור בקבוקי T75. השאר את התאים לדגירה בטמפרטורת החדר למשך 8-10 דקות כדי לנתק אותם. לאחר הדגירה, ערבב בעדינות את התאים עם 10 מ"ל של מדיום כדי להחזיר אותם לתמיסה, ואז סובב בצנטריפוגה ב-300xg למשך 3 דקות. השלך את הנוזל העליון, החזר את התאים לתמיסה במדיום טרי והעבר אותם לצלחות חדשות שכבר מכילות מדיום טרי.
- Split ratio
- 1 עד 3
- Seeding density
- 2 עד 4 x 104 תאים/סמ"ר
- Fluid renewal
- כל 2-3 ימים
- Thawing and culturing
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
07Quality control and cryopreservation
- Sterility
זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה.
כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.
- Freeze medium
- כמדיום לשימור בקירור, אנו משתמשים במדיום גידול מלא (כולל FBS) + 10% DMSO כדי להבטיח חיוניות נאותה לאחר ההפשרה, או CM-1 (מספר קטלוגי Cytion 800100), הכולל חומרים אוסמו-מגנים ומייצבי מטבוליזם משופרים כדי לשפר את ההתאוששות ולהפחית את הלחץ הנגרם מהקפאה.
- Storage conditions
לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.
- Shipping conditions
שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.
08Donor
- Breed / subspecies
- C3H/Mai
- Donor age
- 1–2 חודשים
09Legal and safety
- Safety precautions
- כאשר מתכננים לאחסן קריוביאל בחנקן נוזלי להפשרה עתידית, חובה להקפיד על אמצעי בטיחות מחמירים. יש להקפיד על שימוש בכפפות ובבגדים מגנים מתאימים, וכן על שימוש במסכת פנים או משקפי מגן בעת העברת דגימות קפואות אל מיכל החנקן הנוזלי או ממנו. זאת כדי להפחית את הסיכון לפציעה כתוצאה מפיצוץ אפשרי של הקריוביאל בעת הוצאתו, העלול לגרום להתזת רסיסים חדים.
- Warranty
ב-Cytion, אנו עומדים מאחורי האיכות והכדאיות של המוצרים שלנו. אנו מבטיחים שתאינו יהיו קיימים בתחילת התרבית למשך 60 יום לאחר המשלוח מהמתקנים שלנו. אנו מבטיחים שכל החומרים תואמים למפרטים המתוארים בתעודת הניתוח ו/או בדף המוצר.
לפרטים מלאים, אנא עיינו ב <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">הצהרת האחריות שלנו
- Material Transfer Agreement required
- Yes
