Skip to content
TCMK-1
Tissue
כליה
Disease
רגיל
Synonyms
TCMK1, Transformed C3H Mouse Kidney-1

Documents

TCMK-1

Cell line · Product number 305361

TCMK-1 is a mouse kidney epithelial cell line that was transformed using simian virus 40 (SV40). This cell line was established to study SV40-induced cell...

US$540.00excl. tax and shipping
In stock
Lot
Recommended (freshest lot)
  • CoA
1

01General information

Description

TCMK-1 הוא קו תאים אפיתליאליים מכליות עכבר שעבר טרנספורמציה באמצעות נגיף הקופים 40 (SV40). קו תאים זה הוקם במטרה לחקור את הטרנספורמציה התאית ואת האונקוגנזה המושרות על ידי SV40 ברקמת הכליה של עכברים. תהליך השינוי הוביל לתאים בעלי מורפולוגיה שונה, יכולת התרבות מוגברת, ויכולת לשמור על צמיחה רציפה במבחנה. תאי TCMK-1 מציגים פנוטיפ אפיתליאלי בעיקר, עם מספר תאים בצורת ציר ותאים ענקיים רב-גרעיניים, שהם מאפיינים נפוצים של קווי תאים שעברו שינוי.

אחד המאפיינים המרכזיים של TCMK-1 הוא נוכחותו של האנטיגן T הגדול של SV40, אשר ממלא תפקיד בשיבוש הוויסות התקין של מחזור התא על ידי השבתת חלבוני מדכאי גידולים כגון p53 ו-RB. מנגנון זה מאפשר חלוקה תאית בלתי מבוקרת ומשפר את הישרדות התאים. מחקרי אימונופלואורסצנציה אישרו את הביטוי של אנטיגנים ספציפיים ל-SV40 בתאי TCMK-1, מה שמספק ראיות נוספות לשינוי גנטי הנגרם על ידי הנגיף. בנוסף, למרות אופיין המשתנה, לא נצפה כי תאים אלה יוצרים גידולים in vivo כאשר הוזרקו לעכברים בעלי מערכת חיסונית תקינה.

TCMK-1 שימש במחקרים העוסקים באונקוגנזה נגיפית, בפיזיולוגיה של תאי כליה ובמנגנוני טרנספורמציה תאית. בשל הטרנספורמציה הנגרמת על ידי SV40, הוא משמש מודל שימושי לחקר האינטראקציות בין הנגיף למאכסן והמסלולים המולקולריים הקשורים להפיכת התאים לבלתי-מתים. עם זאת, על החוקרים לקחת בחשבון כי נוכחותו של אנטיגן T של SV40 עשויה להשפיע על תפקודים תאיים נורמליים, דבר שעלול להשפיע על תוצאות הניסויים.

Tissue
כליה
Disease
רגיל
Synonyms
  • TCMK1
  • Transformed C3H Mouse Kidney-1

02Classification

Organism
Mouse
Sex
Unspecified
Growth properties
Adherent
GMO status
GMO-S1
GMO status details
GMO-S1: This murine kidney-derived cell line (TCMK-1) contains an SV40 T-Antigen introduced by infection with SV40 strain 777, supporting transformed and sustained proliferation. The viral sequences are stably present. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosafety level
1

03Characteristics

Morphology
אפיתל
Tumourigenic
לא; לא, בעכברים עם דיכוי חיסוני; כן, במצע חצי-מוצק
Karyotype
המספר המודלי = 78; הטווח = 64 עד 157. בכל התאים נצפו 2–6 כרומוזומים אקרוצנטריים עם היצרויות משניות ו-1–4 כרומוזומים דו-זרועיים לכל תא. ב-60% מהתאים נצפה כרומוזום זעיר אחד או יותר.

04Identifiers

Citation
TCMK-1 (מספר קטלוג Cytion 305361)
NCBI TaxID
10090
Cellosaurus
CVCL_2772

05Expression and susceptibility

Antigen expression
H-2k
Viruses
SV40
Virus susceptibility
דלקת הפה והלשון הבלוטית, גלזגו (אינדיאנה); נגיף הפוליו האנושי 1

06Handling and culture

Culture medium
RPMI 1640, w: 2.0 mM גלוטמין יציב, w: 2.0 g/L NaHCO3 (מספר קטלוגי של Cytion 820700a)
Incubation atmosphere

37°C, 5%CO2, אווירה לחה.

Supplements
יש להוסיף למדיום 10% FBS ו-10 מ"מ HEPES, 2.5 גרם/ליטר גלוקוז, 1 מ"מ פירובט נתרן
Dissociation reagent
Accutase, 10 דקות בטמפרטורה של 37°C
Subculturing
הסר את המדיום הישן מהתאים הדבוקים ושטוף אותם ב-PBS ללא סידן ומגנזיום. עבור בקבוקי T25, השתמש ב-3-5 מ"ל PBS, ועבור בקבוקי T75, השתמש ב-5-10 מ"ל. לאחר מכן, כסה את התאים לחלוטין ב-Accutase, תוך שימוש ב-1-2 מ"ל עבור בקבוקי T25 ו-2.5 מ"ל עבור בקבוקי T75. השאר את התאים לדגירה בטמפרטורת החדר למשך 8-10 דקות כדי לנתק אותם. לאחר הדגירה, ערבב בעדינות את התאים עם 10 מ"ל של מדיום כדי להחזיר אותם לתמיסה, ואז סובב בצנטריפוגה ב-300xg למשך 3 דקות. השלך את הנוזל העליון, החזר את התאים לתמיסה במדיום טרי והעבר אותם לצלחות חדשות שכבר מכילות מדיום טרי.
Split ratio
1 עד 3
Seeding density
2 עד 4 x 104 תאים/סמ"ר
Fluid renewal
כל 2-3 ימים
Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Quality control and cryopreservation

Sterility

זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה.

כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.

Freeze medium
כמדיום לשימור בקירור, אנו משתמשים במדיום גידול מלא (כולל FBS) + 10% DMSO כדי להבטיח חיוניות נאותה לאחר ההפשרה, או CM-1 (מספר קטלוגי Cytion 800100), הכולל חומרים אוסמו-מגנים ומייצבי מטבוליזם משופרים כדי לשפר את ההתאוששות ולהפחית את הלחץ הנגרם מהקפאה.
Storage conditions

לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

Shipping conditions

שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.

08Donor

Breed / subspecies
C3H/Mai
Donor age
1–2 חודשים