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TCMK-1
ティッシュ
腎臓
病気
ノーマル
同義語
TCMK1, Transformed C3H Mouse Kidney-1

TCMK-1

Cell line · 製品番号 305361

TCMK-1 is a mouse kidney epithelial cell line that was transformed using simian virus 40 (SV40). This cell line was established to study SV40-induced cell...

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01概要

説明

TCMK-1は、サルウイルス40(SV40)を用いて形質転換されたマウスの腎臓上皮細胞株である。この細胞株は、マウス腎組織におけるSV40による細胞形質転換および発がんの研究を目的として樹立された。 形質転換の過程を経て、細胞の形態が変化し、増殖能が高まり、in vitroで持続的な増殖を維持する能力を獲得した。TCMK-1細胞は、主に上皮様表現型を示すが、紡錘形細胞や多核巨細胞も一部認められ、これらは形質転換細胞株に共通する特徴である。

TCMK-1の重要な特徴の一つは、SV40の大型T抗原の存在である。この抗原は、p53やRBなどの腫瘍抑制タンパク質を不活性化することで、正常な細胞周期の調節を阻害する役割を果たす。 このメカニズムにより、制御不能な細胞分裂が促進され、細胞の生存率が向上する。免疫蛍光法による研究により、TCMK-1細胞におけるSV40特異的抗原の発現が確認されており、これはウイルスによる形質転換のさらなる証拠となっている。さらに、形質転換された性質を持つにもかかわらず、免疫能を有するマウスに注入した場合、これらの細胞がin vivoで腫瘍を形成することは観察されていない。

TCMK-1は、ウイルス性発がん、腎細胞の生理学、および細胞形質転換のメカニズムに関する研究に利用されてきた。SV40による形質転換を受けているため、ウイルスと宿主の相互作用や、細胞の不死化に関連する分子経路を研究するための有用なモデルとなっている。 ただし、研究者は、SV40 T抗原の存在が正常な細胞機能に影響を及ぼし、その結果、実験結果に偏りが生じる可能性があることを考慮すべきである。

ティッシュ
腎臓
病気
ノーマル
同義語
  • TCMK1
  • Transformed C3H Mouse Kidney-1

02分類

生物
マウス
セックス
未指定
成長特性
アドヘレント
GMOの有無
GMO-S1
GMOのステータスに関する詳細
GMO-S1: This murine kidney-derived cell line (TCMK-1) contains an SV40 T-Antigen introduced by infection with SV40 strain 777, supporting transformed and sustained proliferation. The viral sequences are stably present. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
バイオセーフティレベル
1

03特徴

形態学
上皮
腫瘍形成性
いいえ;いいえ(免疫抑制マウスでは);はい(半固体培地では)
核型
モード数=78、範囲=64~157。すべての細胞において、二次狭窄部を有する2~6本の先端中心染色体と、1細胞あたり1~4本の二腕染色体が認められた。細胞の60%には、1本以上の微小染色体が存在した。

04識別子

引用
TCMK-1(Cytion カタログ番号 305361)
NCBI 納税者番号
10090
セロサウルス
CVCL_2772

05発現と感受性

抗原発現
H-2k
ウイルス
SV40
ウイルス感受性
水疱性口内炎、グラスゴー(インディアナ州);ヒトポリオウイルス1型

06取り扱いと飼育

培地
RPMI1640、w:2.0mM安定グルタミン、w:2.0g/L NaHCO3(Cytion article number 820700a)
培養雰囲気

37℃、5%CO2、加湿雰囲気。

サプリメント
培地に10% FBS、10 mM HEPES、2.5 g/L グルコース、1 mM ピルビン酸ナトリウムを添加する。
解離試薬
Accutase 37°Cで10分間
継代培養
接着した細胞から古いメデュームを取り除き、カルシウムとマグネシウ ムを除いたPBSで洗浄する。T25フラスコでは3-5ml、T75フラスコでは5-10mlのPBSを使用する。次に、T25フラスコでは1-2ml、T75フラスコでは2.5mlのアキュターゼで細胞を完全に覆う。室温で8-10分間インキュベートし、細胞を剥離させる。インキュベーション後、細胞を10mlの培地と静かに混合して再懸濁し、300xgで3分間遠心する。上清を捨て、細胞を新しいメデュームに懸濁し、新しいメデュームの入った新しいフラスコに移す。
分割比率
1~3
播種密度
2~4 × 10⁴ 細胞/cm²
流体の更新
2~3日ごと
解凍と培養
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07品質管理と凍結保存

無菌性

マイコプラズマ汚染は、PCRベースのアッセイと発光ベースのマイコプラズマ検出法の両方を用いて除外される。

細菌、真菌、酵母のコンタミネーションがないことを確認するため、細胞培養物は毎日目視検査が行われる。

凍結培地
凍結保存培地としては、融解後の生存率を十分に高めるために完全増殖培地(FBSを含む)+10%DMSO、または回復を促進し凍結によるストレスを軽減するために最適化された浸透保護剤と代謝安定剤を含むCM-1(Cytionカタログ番号800100)を使用している。
保管条件

長期保存の場合、バイアルを-150~-196℃の気相液体窒素に入れる。80℃での保存は、液体窒素に移す前の短い暫定措置としてのみ許容される。

配送条件

凍結保存された細胞株は、輸送中約-78℃を維持するのに十分な保冷剤とともに、有効な断熱包装でドライアイスとともに輸送される。受領後、直ちに容器を検査し、遅滞なくバイアルを適切な保管場所に移してください。

08寄付者

品種/亜種
C3H/Mai
ドナーの年齢
1~2ヶ月