Mine otse sisu juurde
TCMK-1
Kude
Neerud
Haigus
Tavaline
Sünonüümid
TCMK1, Transformed C3H Mouse Kidney-1

Dokumendid

TCMK-1

Cell line · Toote number 305361

TCMK-1 is a mouse kidney epithelial cell line that was transformed using simian virus 40 (SV40). This cell line was established to study SV40-induced cell...

€540.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta

Kohandamine / Soovitused

Laos
Lot
Soovitatav (värskeim partii)
  • CoA
1

01Üldine teave

Kirjeldus

TCMK-1 on hiire neeru epiteelirakkude liin, mida transformeeriti ahviviiruse 40 (SV40) abil. See rakuliin loodi SV40 poolt indutseeritud rakulise transformatsiooni ja onkogeneesi uurimiseks hiire neerukoes. Transformatsiooniprotsessi tulemusena tekkisid rakud, millel oli muutunud morfoloogia, suurenenud proliferatsioonivõime ja võime säilitada pidevat kasvu in vitro. TCMK-1 rakud näitavad peamiselt epiteelilist fenotüüpi, milles esineb mõningaid värtjasrakke ja mitmetuumalisi hiiglasrakke, mis on transformatsiooniliste rakuliinide tüüpilised tunnused.

Üks TCMK-1 peamisi omadusi on SV40 suure T-antigeeni esinemine, mis häirib normaalset rakutsükli regulatsiooni, inaktiveerides kasvajavastaseid valke, nagu p53 ja RB. See mehhanism soodustab kontrollimatut rakkude jagunemist ja suurendab rakkude ellujäämist. Immunofluorestsentsuuringud on kinnitanud SV40-spetsiifiliste antigeenide ekspressiooni TCMK-1 rakkudes, pakkudes täiendavat tõendusmaterjali viirusest tingitud transformatsiooni kohta. Lisaks sellele ei ole nende rakkude puhul, hoolimata nende transformatsioonist, täheldatud kasvajate tekkimist in vivo, kui neid süstitakse immuunkompetentsetele hiirtele.

TCMK-1-i on kasutatud viirusliku onkogeneesi, neerurakkude füsioloogia ja rakuliste transformatsioonimehhanismide uurimisel. Tänu SV40-transformatsioonile on see kasulik mudel viiruse ja peremeesorganismi vaheliste interaktsioonide ning rakkude surematusega seotud molekulaarsete signaaliteede uurimiseks. Siiski peaksid teadlased arvestama, et SV40 T-antigeeni olemasolu võib mõjutada rakkude normaalset funktsioneerimist, mis omakorda võib mõjutada eksperimendi tulemusi.

Kude
Neerud
Haigus
Tavaline
Sünonüümid
  • TCMK1
  • Transformed C3H Mouse Kidney-1

02Klassifikatsioon

Organism
Hiir
Sugu
Määratlemata
Kasvuvõime
Järgija
GMO-staatus
GMO-S1
GMO-staatuse üksikasjad
GMO-S1: This murine kidney-derived cell line (TCMK-1) contains an SV40 T-Antigen introduced by infection with SV40 strain 777, supporting transformed and sustained proliferation. The viral sequences are stably present. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioloogilise ohutuse tase
1

03Omadused

Morfoloogia
Epiteel
Tuumorigeenne
Ei; Ei, immuunsüsteemi nõrgenenud hiirtel; Jah, pooltahkes kasvukeskkonnas
Karyotüüp
Modaalne arv = 78; vahemik = 64–157. Kõikides rakkudes oli 2–6 akrotsentrilist kromosoomi sekundaarsete kitsendustega ning 1–4 kaheharulist kromosoomi raku kohta. Kuuskümmend protsenti rakkudest sisaldas ühte või enamat pisikest kromosoomi.

04Tunnused

Viide
TCMK-1 (Cytioni katalooginumber 305361)
NCBI maksukood
10090
Cellosaurus
CVCL_2772

05Avaldumine ja vastuvõtlikkus

Antigeeni ekspressioon
H-2k
Viirused
SV40
Viirusele vastuvõtlikkus
Vesikulaarne stomatiit, Glasgow (Indiana); inimese poliovirus 1

06Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiilne glutamiin, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytioni artikli number 820700a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Lisage kasvukeskkonnale 10% FBS-i ja 10 mM HEPES-i, 2,5 g/l glükoosi ning 1 mM naatriumpüruvaati
Dissotsiatsioonireaktiiv
Accutase 10 minutit 37 °C juures
Kultuuri edasikasvatamine
Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Jagamissuhe
1–3
Külvitihedus
2 kuni 4 x 104 rakku/cm2
Vedeliku vahetus
Iga 2 kuni 3 päeva tagant
Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

08Annetaja

Tõug / alamliik
C3H/Mai
Doonori vanus
1–2 kuud