Tartalomra ugrás
TCMK-1
Szövet
Vese
Betegség
Normál
Szinonimák
TCMK1, Transformed C3H Mouse Kidney-1

Dokumentumok

TCMK-1

Cell line · Termékszám 305361

TCMK-1 is a mouse kidney epithelial cell line that was transformed using simian virus 40 (SV40). This cell line was established to study SV40-induced cell...

€540.00adó és szállítási költség nélkül

Személyre szabás / Ajánlások

Raktáron van
Lot
Ajánlott (a legfrissebb tétel)
  • CoA
1

01Általános információk

Leírás

A TCMK-1 egy egér veseepiteliális sejtvonal, amelyet a 40-es számú majomvírussal (SV40) transzformáltak. Ezt a sejtvonalat az SV40 által kiváltott sejttranszformáció és onkogenezis vizsgálatára hozták létre egér vese szövetben. A transzformációs folyamat eredményeként olyan sejtek jöttek létre, amelyek morfológiája megváltozott, proliferációs képességük megnőtt, és képesek voltak in vitro körülmények között folyamatos növekedést fenntartani. A TCMK-1 sejtek túlnyomórészt epiteliális fenotípust mutatnak, néhány orsó alakú sejttel és többmagvú óriássejtekkel, amelyek a transzformált sejtvonalak jellemző tulajdonságai.

A TCMK-1 egyik legfontosabb jellemzője az SV40 nagy T-antigén jelenléte, amely szerepet játszik a normális sejtciklus-szabályozás megzavarásában azáltal, hogy inaktiválja a p53 és az RB-hez hasonló tumor-szupresszor fehérjéket. Ez a mechanizmus elősegíti az ellenőrizhetetlen sejtosztódást és fokozza a sejtek túlélését. Immunfluoreszcencia-vizsgálatok megerősítették az SV40-specifikus antigének expresszióját a TCMK-1 sejtekben, ami további bizonyítékot szolgáltat a vírus által kiváltott transzformációra. Ezen felül, transzformált jellegük ellenére, ezek a sejtek nem alakítottak ki daganatokat in vivo, amikor immunokompetens egerekbe injektálták őket.

A TCMK-1-et a vírusos onkogenezis, a vesesejt-fiziológia és a sejttranszformációs mechanizmusok kutatásában használják. SV40-transzformációja miatt hasznos modellként szolgál a vírus–gazda kölcsönhatások és a sejtek halhatatlanná válásával kapcsolatos molekuláris útvonalak tanulmányozásához. A kutatóknak azonban figyelembe kell venniük, hogy az SV40 T-antigén jelenléte hatással lehet a normális sejtfunkciókra, ami befolyásolhatja a kísérleti eredményeket.

Szövet
Vese
Betegség
Normál
Szinonimák
  • TCMK1
  • Transformed C3H Mouse Kidney-1

02Osztályozás

Organizmus
Egér
Szex
Nem meghatározott
Növekedési tulajdonságok
Hűséges
GMO-státusz
GMO-S1
A GMO-státuszra vonatkozó részletek
GMO-S1: This murine kidney-derived cell line (TCMK-1) contains an SV40 T-Antigen introduced by infection with SV40 strain 777, supporting transformed and sustained proliferation. The viral sequences are stably present. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biológiai biztonsági szint
1

03Jellemzők

Morfológia
Epithelialis
Daganatképző
Nem; Nem, immunszuppresszált egerekben; Igen, félszilárd táptalajban
Kariotípus
Modális szám = 78; tartomány = 64–157. Minden sejtben 2–6 akrocentrikus kromoszóma volt megfigyelhető másodlagos szűkületekkel, valamint sejtenként 1–4 kétkarú kromoszóma. A sejtek 60%-ában egy vagy több apró kromoszóma volt jelen.

04Azonosítók

Hivatkozás
TCMK-1 (Cytion katalógusszám: 305361)
NCBI adóazonosító szám
10090
Cellosaurus
CVCL_2772

05Kifejeződés és fogékonyság

Antigén-expresszió
H-2k
Vírusok
SV40
Vírusérzékenység
Hólyagos szájgyulladás, Glasgow (Indiana); 1-es típusú humán poliovírus

06Kezelés és tenyésztés

Táptalaj
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabil glutamin, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion 820700a cikkszám)
Inkubációs környezet

37°C, 5%CO2, párásított légkör.

Kiegészítők
A táptalajt egészítsük ki 10%-os FBS-sel, 10 mM HEPES-szel, 2,5 g/l glükózzal és 1 mM nátrium-piruváttal
Diszociációs reagens
Accutase 10 percig 37 °C-on
Átültetés
Távolítsa el a régi táptalajt a megtapadt sejtekről, és mossa őket kalcium- és magnéziummentes PBS-szel. T25-ös lombikokhoz 3-5 ml PBS-t, T75-ös lombikokhoz pedig 5-10 ml-t használjunk. Ezután fedjük be a sejteket teljesen Accutase-zal, T25 lombikok esetében 1-2 ml-t, T75 lombikok esetében 2,5 ml-t használva. A sejteket 8-10 percig hagyjuk szobahőmérsékleten inkubálni, hogy leváljanak. Az inkubálás után óvatosan keverjük össze a sejteket 10 ml tápfolyadékkal, hogy reszuszpendáljuk őket, majd centrifugáljuk 300xg-nél 3 percig. Dobja el a felülúszót, szuszpendálja újra a sejteket friss tápfolyadékban, és helyezze át őket új lombikokba, amelyek már friss tápfolyadékot tartalmaznak.
Osztási arány
1–3
Ültetési sűrűség
2–4 x 104 sejt/cm2
Folyadékcsere
2-3 naponta
Felolvasztás és tenyésztés
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Minőségellenőrzés és kriokonzerválás

Meddőség

A mikoplazma-szennyeződést mind a PCR-alapú vizsgálatokkal, mind a lumineszcencia-alapú mikoplazma-kimutatási módszerekkel kizárják.

A bakteriális, gombás vagy élesztőgombás szennyeződés elkerülése érdekében a sejtkultúrákat napi vizuális ellenőrzésnek vetik alá.

Fagyasztóközeg
Krioprezerváló táptalajként teljes növekedési táptalajt (beleértve az FBS-t) + 10% DMSO-t használunk a megfelelő kiolvasztás utáni életképesség érdekében, vagy CM-1-et (Cytion katalógusszám: 800100), amely optimalizált ozmoprotektánsokat és metabolikus stabilizátorokat tartalmaz a regenerálódás fokozása és a krio-indukált stressz csökkentése érdekében.
Tárolási feltételek

Hosszú távú tartósítás céljából helyezze az üvegeket gőzfázisú folyékony nitrogénbe, körülbelül -150 és -196 °C közötti hőmérsékleten. A -80 °C-on történő tárolás csak rövid átmeneti lépésként fogadható el a folyékony nitrogénbe való átvitel előtt.

Szállítási feltételek

A kriokonzervált sejtvonalakat szárazjégen, validált, szigetelt csomagolásban szállítják, elegendő hűtőközeggel, hogy a szállítás során a hőmérsékletet körülbelül -78 °C-on tartsák. Átvételkor azonnal vizsgálja meg a tárolóedényt, és haladéktalanul helyezze át az injekciós üvegeket a megfelelő tárolóhelyre.

08Adományozó

Faj / alfaj
C3H/Mai
Az adományozó életkora
1–2 hónap