Prejsť na obsah
TCMK-1
Tkanivo
Obličky
Choroba
Normálne
Synonymá
TCMK1, Transformed C3H Mouse Kidney-1

Dokumenty

TCMK-1

Cell line · Číslo výrobku 305361

TCMK-1 is a mouse kidney epithelial cell line that was transformed using simian virus 40 (SV40). This cell line was established to study SV40-induced cell...

€540.00bez DPH a poštovného

Prispôsobenie / Odporúčania

Na sklade
Lot
Odporúčané (najčerstvejšia várka)
  • CoA
1

01Všeobecné informácie

Popis

TCMK-1 je myšia epiteliálna bunková línia obličiek, ktorá bola transformovaná pomocou opičieho vírusu 40 (SV40). Táto bunková línia bola vytvorená na účely štúdia bunkovej transformácie a onkogenézy vyvolanej vírusom SV40 v tkanive myších obličiek. Výsledkom transformačného procesu boli bunky so zmenenou morfológiou, zvýšenou proliferačnou schopnosťou a schopnosťou udržiavať nepretržitý rast in vitro. Bunky TCMK-1 vykazujú prevažne epiteliálny fenotyp s niektorými vretenovitými bunkami a viacjadrovými obrovskými bunkami, čo sú bežné znaky transformovaných bunkových línií.

Jednou z kľúčových charakteristík TCMK-1 je prítomnosť veľkého T-antigénu SV40, ktorý zohráva úlohu pri narúšaní normálnej regulácie bunkového cyklu tým, že inaktivuje proteíny potláčajúce nádory, ako sú p53 a RB. Tento mechanizmus uľahčuje nekontrolované delenie buniek a zvyšuje ich prežívanie. Imunofluorescenčné štúdie potvrdili expresiu antigénov špecifických pre vírus SV40 v bunkách TCMK-1, čo poskytuje ďalší dôkaz vírusom indukovanej transformácie. Navyše, napriek svojej transformovanej povahe nebolo pozorované, že by tieto bunky po injekcii do imunokompetentných myší tvorili nádory in vivo.

TCMK-1 sa používa vo výskume týkajúcom sa vírusovej onkogenézy, fyziológie obličkových buniek a mechanizmov bunkovej transformácie. Vďaka svojej transformácii vírusom SV40 slúži ako užitočný model na štúdium interakcií medzi vírusom a hostiteľom a molekulárnych dráh spojených s imortalizáciou buniek. Výskumníci by však mali zohľadniť, že prítomnosť T-antigénu vírusu SV40 môže ovplyvniť normálne bunkové funkcie, čo by mohlo mať vplyv na výsledky experimentov.

Tkanivo
Obličky
Choroba
Normálne
Synonymá
  • TCMK1
  • Transformed C3H Mouse Kidney-1

02Klasifikácia

Organizmus
Myš
Sex
Nešpecifikované
Rastové vlastnosti
Prívrženec
Stav GMO
GMO-S1
Podrobnosti o štatúte GMO
GMO-S1: This murine kidney-derived cell line (TCMK-1) contains an SV40 T-Antigen introduced by infection with SV40 strain 777, supporting transformed and sustained proliferation. The viral sequences are stably present. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Úroveň biologickej bezpečnosti
1

03Charakteristiky

Morfológia
Epitelové
Tumorigenický
Nie; Nie, u myší s oslabenou imunitou; Áno, v polotuhom médiu
Karyotyp
Modálne číslo = 78; rozsah = 64 až 157. Vo všetkých bunkách sa nachádzalo 2 až 6 akrocentrických chromozómov so sekundárnymi zúženiami a 1 až 4 dvojramenné chromozómy na bunku. Šesťdesiat percent buniek obsahovalo jeden alebo viac mikroskopických chromozómov.

04Identifikátory

Citácia
TCMK-1 (katalógové číslo Cytion 305361)
Daňové identifikačné číslo NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_2772

05Prejav a náchylnosť

Expresia antigénu
H-2k
Vírusy
SV40
Náchylnosť na vírusy
Vezikulárna stomatitída, Glasgow (Indiana); ľudský poliovírus 1

06Manipulácia a kultivácia

Kultivačné médium
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabilný glutamín, w: 2,0 g/L NaHCO3 (číslo výrobku Cytion 820700a)
Inkubačná atmosféra

37 °C, 5 %CO2, zvlhčená atmosféra.

Doplnky stravy
Do živného média pridajte 10 % FBS a 10 mM HEPES, 2,5 g/l glukózy a 1 mM sodného pyruvátu
Disociačné činidlo
Accutase 10 minút pri 37 °C
Rozmnožovanie kultúr
Odstráňte staré médium z adherovaných buniek a premyte ich PBS, ktorý neobsahuje vápnik a horčík. Pre banky T25 použite 3 - 5 ml PBS a pre banky T75 použite 5 - 10 ml. Potom bunky úplne pokryte Accutase, pričom použite 1 - 2 ml pre banky T25 a 2,5 ml pre banky T75. Nechajte bunky inkubovať pri izbovej teplote 8-10 minút, aby sa oddelili. Po inkubácii jemne premiešajte bunky s 10 ml média, aby boli znovu suspendované, a potom ich 3 minúty odstreďujte pri 300xg. Supernatant zlikvidujte, bunky znovu rozmiešajte v čerstvom médiu a preneste ich do nových fliaš, ktoré už obsahujú čerstvé médium.
Pomer rozdelenia
1 až 3
Hustota výsevu
2 až 4 x 104 buniek/cm2
Obnova kvapaliny
Každé 2 až 3 dni
Rozmrazovanie a kultivácia
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola kvality a kryokonzervácia

Sterilita

Kontaminácia mykoplazmami sa vylučuje pomocou testov založených na PCR a metód detekcie mykoplaziem založených na luminiscencii.

Aby sa zabezpečilo, že nedošlo ku kontaminácii baktériami, hubami alebo kvasinkami, bunkové kultúry sa denne vizuálne kontrolujú.

Mrazové médium
Ako kryokonzervačné médium používame kompletné rastové médium (vrátane FBS) + 10 % DMSO na zabezpečenie primeranej životaschopnosti po rozmrazení alebo CM-1 (katalógové číslo 800100 spoločnosti Cytion), ktoré obsahuje optimalizované osmoprotektanty a metabolické stabilizátory na zlepšenie obnovy a zníženie stresu spôsobeného kryo.
Podmienky skladovania

Na dlhodobé uchovávanie umiestnite injekčné liekovky do kvapalnej fázy dusíka v pare pri teplote približne -150 až -196 °C. Skladovanie pri teplote -80 °C je prijateľné len ako krátky prechodný krok pred presunom do tekutého dusíka.

Dopravné podmienky

Kryokonzervované bunkové línie sa prepravujú na suchom ľade v overených, izolovaných obaloch s dostatočným množstvom chladiva na udržanie teploty približne -78 °C počas celej prepravy. Po prijatí ihneď skontrolujte obal a bezodkladne premiestnite injekčné liekovky do vhodného skladu.

08Darca

Plemeno / poddruh
C3H/Mai
Vek darcu
1–2 mesiace