Preskoči na vsebino
TCMK-1
Tkivo
Ledvice
Bolezen
Normalno
Sinonimi
TCMK1, Transformed C3H Mouse Kidney-1

Dokumenti

TCMK-1

Cell line · Številka izdelka 305361

TCMK-1 is a mouse kidney epithelial cell line that was transformed using simian virus 40 (SV40). This cell line was established to study SV40-induced cell...

€540.00brez davka in stroškov poštnine

Prilagajanje / Priporočila

Na zalogi
Lot
Priporočeno (najsvežja pošiljka)
  • CoA
1

01Splošne informacije

Opis

TCMK-1 je linija epitelnih celic mišjih ledvic, ki je bila transformirana z opičjim virusom 40 (SV40). Ta celična linija je bila vzpostavljena za preučevanje celične transformacije in onkogeneze, ki ju povzroča SV40, v tkivu mišjih ledvic. Proces transformacije je povzročil nastanek celic s spremenjeno morfologijo, povečano sposobnostjo proliferacije in zmožnostjo ohranjanja neprekinjene rasti in vitro. Celice TCMK-1 kažejo pretežno epitelijski fenotip z nekaterimi vretenastimi celicami in večjedrskimi velikimi celicami, kar so pogoste značilnosti transformiranih celičnih linij.

Ena od ključnih značilnosti linije TCMK-1 je prisotnost velikega T-antigena SV40, ki moti normalno regulacijo celičnega cikla z inaktivacijo tumor supresorskih beljakovin, kot sta p53 in RB. Ta mehanizem omogoča nenadzorovano celično delitev in poveča preživetje celic. Imunofluorescenčne študije so potrdile izražanje antigenov, specifičnih za SV40, v celicah TCMK-1, kar zagotavlja dodatne dokaze o virusno povzročeni transformaciji. Poleg tega kljub svoji transformirani naravi pri teh celicah ni bilo opaziti nastajanja tumorjev in vivo ob injiciranju v imunokompetentne miši.

TCMK-1 se uporablja v raziskavah, ki obravnavajo virusno onkogenezo, fiziologijo ledvičnih celic in mehanizme celične transformacije. Zaradi svoje transformacije s SV40 služi kot uporaben model za preučevanje interakcij med virusom in gostiteljem ter molekularnih poti, povezanih z imortalizacijo celic. Vendar pa morajo raziskovalci upoštevati, da lahko prisotnost T-antigena SV40 vpliva na normalne celične funkcije, kar bi lahko vplivalo na rezultate poskusov.

Tkivo
Ledvice
Bolezen
Normalno
Sinonimi
  • TCMK1
  • Transformed C3H Mouse Kidney-1

02Razvrstitev

Organizem
Miška
Seks
Ni navedeno
Lastnosti rasti
Pripadnik
Status GSO
GMO-S1
Podrobnosti o statusu GSO
GMO-S1: This murine kidney-derived cell line (TCMK-1) contains an SV40 T-Antigen introduced by infection with SV40 strain 777, supporting transformed and sustained proliferation. The viral sequences are stably present. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Stopnja biološke varnosti
1

03Značilnosti

Morfologija
Epitelijski
Tumorigeničen
Ne; Ne, pri imunsko oslabljenih miših; Da, v poltrdnem gojišču
Kariotip
Modalno število = 78; razpon = od 64 do 157. Vse celice so imele 2–6 akrocentričnih kromosomov s sekundarnimi zožitvami ter 1–4 dvokrilne kromosome na celico. Šestdeset odstotkov celic je imelo enega ali več drobnih kromosomov.

04Identifikatorji

Navajanje vira
TCMK-1 (kataloška številka Cytion 305361)
Davčna identifikacijska številka NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_2772

05Izražanje in dovzetnost

Ekspresija antigena
H-2k
Virusi
SV40
Občutljivost na virus
Vezikularni stomatitis, Glasgow (Indiana); človeški poliovirus 1

06Ravnanje in gojenje

Gojišče
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabilnega glutamina, w: 2,0 g/L NaHCO3 (številka izdelka Cytion 820700a)
Inkubacijska atmosfera

37 °C, 5 %CO2, vlažno ozračje.

Prehranska dopolnila
Gojilnemu mediju dodajte 10 % FBS in 10 mM HEPES, 2,5 g/l glukoze ter 1 mM natrijevega piruvata
Reagenca za disociacijo
Accutase 10 minut pri 37 °C
Preusmeritev v drugo kulturo
Odstranite staro gojišče z adherentnih celic in jih sperite s PBS, ki ne vsebuje kalcija in magnezija. Za bučke T25 uporabite 3-5 ml PBS, za bučke T75 pa 5-10 ml. Nato celice popolnoma prekrijte z Accutase, pri čemer uporabite 1-2 ml za bučke T25 in 2,5 ml za bučke T75. Celice pustite inkubirati pri sobni temperaturi 8-10 minut, da se ločijo. Po inkubaciji celice nežno premešajte z 10 ml gojišča, da se ponovno suspendirajo, nato jih 3 minute centrifugirajte pri 300xg. Zavrzite supernatant, ponovno suspendirajte celice v svežem gojišču in jih prenesite v nove bučke, ki že vsebujejo sveže gojišče.
Razmerje delitve
1 do 3
Gostota setve
2 do 4 x 104 celic/cm2
Obnova tekočine
Vsakih 2 do 3 dni
Odtaljevanje in gojenje
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola kakovosti in krioprezervacija

Sterilnost

Kontaminacija z mikoplazmo se izključi z uporabo testov na podlagi PCR in metod za odkrivanje mikoplazme na podlagi luminiscence.

Da se zagotovi, da ni kontaminacije z bakterijami, glivami ali kvasovkami, se celične kulture dnevno vizualno pregledujejo.

Medij za zamrzovanje
Kot gojišče za kriokonzervacijo uporabljamo popolno rastno gojišče (vključno s FBS) + 10 % DMSO za ustrezno vitalnost po odmrznitvi ali CM-1 (kataloška številka 800100 podjetja Cytion), ki vključuje optimizirane osmoprotektante in presnovne stabilizatorje za izboljšanje okrevanja in zmanjšanje stresa, povzročenega s kriom.
Pogoji shranjevanja

Za dolgotrajno shranjevanje viale postavite v tekoči dušik v parni fazi pri približno -150 do -196 °C. Shranjevanje pri -80 °C je sprejemljivo le kot kratek vmesni korak pred prenosom v tekoči dušik.

Pogoji dostave

Kriokonzervirane celične linije se pošiljajo na suhem ledu v potrjeni, izolirani embalaži z zadostno količino hladilnega sredstva, da se med prevozom vzdržuje približno -78 °C. Ob prejemu takoj preglejte embalažo in viale nemudoma prenesite v ustrezno skladišče.

08Donator

Pasma / podvrsta
C3H/Mai
Starost darovalca
1–2 meseca