Przejdź do treści
TCMK-1
Chusteczka
Nerka
Choroba
Normalny
Synonimy
TCMK1, Transformed C3H Mouse Kidney-1

Dokumenty

TCMK-1

Cell line · Numer produktu 305361

TCMK-1 is a mouse kidney epithelial cell line that was transformed using simian virus 40 (SV40). This cell line was established to study SV40-induced cell...

€540.00bez podatku i kosztów wysyłki

Dostosowanie / Zalecenia

W magazynie
Lot
Polecane (najświeższa partia)
  • CoA
1

01Informacje ogólne

Opis

TCMK-1 to mysia linia komórek nabłonkowych nerki, która została ztransformowana za pomocą wirusa małpiego 40 (SV40). Linia ta została utworzona w celu badania indukowanej przez SV40 transformacji komórkowej oraz onkogenezy w mysiej tkance nerkowej. W wyniku procesu transformacji powstały komórki o zmienionej morfologii, zwiększonej zdolności proliferacyjnej oraz zdolności do utrzymania ciągłego wzrostu in vitro. Komórki TCMK-1 wykazują fenotyp głównie nabłonkowy, z pewną liczbą komórek wrzecionowatych i wielojądrowych komórek olbrzymich, co stanowi typowe cechy transformowanych linii komórkowych.

Jedną z kluczowych cech linii TCMK-1 jest obecność dużego antygenu T wirusa SV40, który odgrywa rolę w zakłócaniu prawidłowej regulacji cyklu komórkowego poprzez inaktywację białek supresorowych nowotworów, takich jak p53 i RB. Mechanizm ten sprzyja niekontrolowanemu podziałowi komórek i zwiększa ich przeżywalność. Badania immunofluorescencyjne potwierdziły ekspresję antygenów specyficznych dla wirusa SV40 w komórkach TCMK-1, dostarczając dalszych dowodów na transformację wywołaną przez wirusa. Ponadto, pomimo swojego transformowanego charakteru, nie zaobserwowano, aby komórki te tworzyły nowotwory in vivo po wstrzyknięciu myszom z prawidłową odpornością.

Linia TCMK-1 jest wykorzystywana w badaniach dotyczących onkogenezy wirusowej, fizjologii komórek nerkowych oraz mechanizmów transformacji komórkowej. Ze względu na transformację wywołaną przez wirusa SV40 stanowi ona użyteczny model do badania interakcji wirus-gospodarz oraz szlaków molekularnych związanych z nieśmiertelnością komórek. Należy jednak pamiętać, że obecność antygenu T wirusa SV40 może wpływać na normalne funkcje komórkowe, co z kolei może oddziaływać na wyniki eksperymentów.

Chusteczka
Nerka
Choroba
Normalny
Synonimy
  • TCMK1
  • Transformed C3H Mouse Kidney-1

02Klasyfikacja

Organizm
Mysz
Seks
Nieokreślone
Właściwości związane ze wzrostem
Zwolennik
Status GMO
GMO-S1
Szczegółowe informacje dotyczące statusu GMO
GMO-S1: This murine kidney-derived cell line (TCMK-1) contains an SV40 T-Antigen introduced by infection with SV40 strain 777, supporting transformed and sustained proliferation. The viral sequences are stably present. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Poziom bezpieczeństwa biologicznego
1

03Cechy charakterystyczne

Morfologia
Nabłonek
Nowotworotwórczy
Nie; Nie – u myszy z obniżoną odpornością; Tak – w pożywce półstałej
Karyotyp
Liczba modalna = 78; zakres = od 64 do 157. We wszystkich komórkach zaobserwowano od 2 do 6 chromosomów akrocentrycznych z wtórnymi zwężeniami oraz od 1 do 4 chromosomów dwuramiennych na komórkę. Sześćdziesiąt procent komórek zawierało co najmniej jeden chromosom o bardzo małej wielkości.

04Identyfikatory

Źródło
TCMK-1 (numer katalogowy Cytion: 305361)
Numer identyfikacji podatkowej NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_2772

05Ekspresja i podatność

Ekspresja antygenu
H-2k
Wirusy
SV40
Podatność na wirusy
Pęcherzykowe zapalenie jamy ustnej, Glasgow (Indiana); wirus polio typu 1

06Postępowanie i hodowla

Pożywka hodowlana
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabilnej glutaminy, w: 2,0 g/L NaHCO3 (numer artykułu Cytion 820700a)
Atmosfera inkubacyjna

37°C, 5%CO2, nawilżona atmosfera.

Suplementy
Do pożywki należy dodać 10% FBS oraz 10 mM HEPES, 2,5 g/l glukozy i 1 mM pirogronianu sodu
Odczynnik dysocjacyjny
Accutase – 10 minut w temperaturze 37°C
Hodowla komórek w subkulturze
Usuń starą pożywkę z przylegających komórek i przemyj je PBS, który nie zawiera wapnia i magnezu. W przypadku kolb T25 należy użyć 3-5 ml PBS, a w przypadku kolb T75 5-10 ml. Następnie całkowicie pokryj komórki Accutase, używając 1-2 ml dla kolb T25 i 2,5 ml dla kolb T75. Pozwól komórkom inkubować w temperaturze pokojowej przez 8-10 minut, aby je oddzielić. Po inkubacji delikatnie wymieszaj komórki z 10 ml pożywki, aby ponownie je zawiesić, a następnie odwiruj przy 300xg przez 3 minuty. Odrzucić supernatant, ponownie zawiesić komórki w świeżej pożywce i przenieść je do nowych kolb zawierających już świeżą pożywkę.
Współczynnik podziału
od 1 do 3
Gęstość wysiewu
2 do 4 x 104 komórek/cm2
Odnawianie płynów
Co 2 do 3 dni
Rozmrażanie i hodowla
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola jakości i kriokonserwacja

Bezpłodność

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

Pożywka do zamrażania
Jako pożywki do kriokonserwacji używamy kompletnej pożywki wzrostowej (w tym FBS) + 10% DMSO w celu zapewnienia odpowiedniej żywotności po rozmrożeniu lub CM-1 (numer katalogowy Cytion 800100), która zawiera zoptymalizowane osmoprotektanty i stabilizatory metaboliczne w celu zwiększenia regeneracji i zmniejszenia stresu wywołanego kriokonserwacją.
Warunki przechowywania

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Warunki wysyłki

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

08Darczyńca

Rasa / podgatunek
C3H/Mai
Wiek dawcy
1–2 miesiące