Pāriet uz saturu
HK/FDC šūnas
Audums
Mutes dobums, mandeles
Slimība
Neonoplastiska folikulāro dendrīto šūnu līnija
Sinonīmi
FDC/HK

Dokumenti

HK/FDC šūnas

Cell line · Preces numurs 300204

Tagad ir pieejamas arī imortalizētas versijas šīm HK/FDC tipa šūnām...

€800.00bez nodokļa un piegādes izmaksām

Pielāgošana / Ieteikumi

Pēc pasūtījuma
1

01Vispārīga informācija

Apraksts
Tagad ir pieejamas arī šoHK/FDC tipa šūnu nemirstīgas versijas, kas nodrošina stabilāku un pielāgojamāku instrumentu FDC funkcijas un B šūnu mijiedarbības ilgtermiņa pētījumiem.

Follicular dendritic cell (FDC) tipa šūnu līnijas (HK šūnas) no cilvēka mandelēm tika izveidotas, lai pētītu FDC lomu limfoīdo folikulu dzimumšūnu centros. Sākotnēji HK šūnas ekspresēja marķierus, piemēram, CD21, CD23, DRC-1, CD40, VCAM-1, ICAM-1 un HJ2, bet trīs kultivēšanas dienu laikā zaudēja DRC-1, CD21 un CD23. Morfolģiski un funkcionāli HK šūnas atšķiras no fibroblastiem un tām ir unikālas augšanas prasības. Tās saistās ar B šūnām, atbalstot to proliferāciju, bet ne ar T šūnām. Aktivētās T šūnas, kas stimulētas ar anti-CD3 antivielām, saistās ar HK šūnām, izraisot fenotipiskas izmaiņas un veicinot to augšanu.

HK šūnas preferenciāli saistās ar un stimulē germinālo centru (GC) B šūnas, glābjot tās no apoptozes. Tās pastiprina B šūnu proliferāciju anti-mu vai anti-CD40 klātbūtnē. Šīs šūnas ražo arī šķīstošus faktorus, kas veicina to kostimulējošo aktivitāti. Fenotipiskā un funkcionālā analīze liecina, ka HK šūnas var būt atvasinātas no FDC, uzsverot to potenciālo lomu GC B šūnu nobriešanā un diferenciācijā.

Audums
Mutes dobums, mandeles
Slimība
Neonoplastiska folikulāro dendrīto šūnu līnija
Pieteikumi
Barotājšūna normālu B limfocītu un limfomu/leikēmiju augšanai. Pētījumi par B šūnu attīstību limfmezglu dzimumcentros. Iespējami pētījumi par FDC vīrusu infekciju
Sinonīmi
  • FDC/HK

02Klasifikācija

Organisms
Cilvēks
Sekss
Nav norādīts
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
ĢMO statuss
Bez ĢMO
Sīkāka informācija par ĢMO statusu
No genetic modification; wildtype immortalized cell line
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Fibroīdi
Šūnu tips
Folikulārās dendrītšūnas
Laiks, kas nepieciešams, lai skaits dubultojās
aptuveni 24–36 stundas

04Identifikatori

Atsauce
HK/FDC (Cytion kataloga numurs 300204)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
9606
Cellosaurus
CVCL_IY38

05Pazīmes un uzņēmība

Virsmas antigēni
CD14+, CD40+, ICAM-1+, VCAM-1+

06Apstrāde un audzēšana

Barotne
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-glutamīns, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytion izstrādājuma numurs 820100a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildināt barotni ar 10% FBS un 1% NEAA
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
Sadalījuma attiecība
no 1 līdz 3
Sēšanas blīvums
1 līdz 3 x 104 šūnas/cm2
Šķidruma atjaunošana
1 līdz 2 reizes nedēļā
Atgūšanās pēc atkusņa
Pēc atkausēšanas izkliedējiet šūnas uz šķīvja ar blīvumu 5 x 104 šūnas/cm2 un ļaujiet šūnām atgūties no sasaldēšanas procesa un pielipt vismaz 24 stundas.
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

08Ziedotājs

Donora vecums
Bērns
Etniskā piederība
Kaukāzietis