661 W

661W to mysia linia komórkowa pochodząca z fotoreceptorów czopkowych, pierwotnie wyhodowana z guza siatkówki powstałego u myszy transgenicznej wyrażającej duży antygen T wirusa małpiego 40 (SV40) pod kontrolą promotora ludzkiego białka wiążącego retinoidy między fotoreceptorami (IRBP). Linia została wygenerowana z poporodowych eksplantatów siatkówki i reprezentuje nieśmiertelne prekursory fotoreceptorów czopkowych. Komórki 661W wykazują przylegający wzrost i są rutynowo utrzymywane w zmodyfikowanym podłożu Dulbecco's Eagle medium uzupełnionym surowicą płodową bydlęcą w standardowych warunkach hodowli. Są one szeroko stosowane jako model in vitro fotoreceptorów czopkowych, szczególnie w badaniach nad uszkodzeniami wywołanymi światłem, stresem oksydacyjnym, apoptozą i mechanizmami degeneracji siatkówki.

Charakterystyka molekularna i transkryptomiczna potwierdza, że komórki 661W wyrażają większość markerów fotoreceptorów czopkowych, w tym opsyny czopkowe i geny związane z fototransdukcją. Badania obrazowe o wysokiej rozdzielczości wykazują, że komórki te tworzą rzęski pierwotne o cechach strukturalnych przypominających rzęski łączące fotoreceptory i segmenty zewnętrzne. Analizy immunocytochemiczne i ultrastrukturalne ujawniają lokalizację białek rzęskowych w aksonemie, błonie i strefie przejściowej, co potwierdza ich przydatność w badaniu rzęskopatii siatkówki. Badania funkcjonalne wykazały, że wyciszenie genów transportu wewnątrzrzęskowego, takich jak Ift88, za pomocą siRNA prowadzi do utraty rzęsek, co potwierdza, że komórki 661W są podatnym systemem do badań mechanistycznych biologii rzęsek.

Komórki 661W są bardzo wrażliwe na stres fotooksydacyjny. Ekspozycja na światło widzialne indukuje apoptyczną śmierć komórek związaną z obniżeniem aktywności NF-κB i aktywacją szlaków kaspazowych. Nadekspresja białek antyapoptotycznych, takich jak Bcl-2, nadaje odporność na apoptozę indukowaną światłem, utrzymując aktywność jądrową NF-κB i poprawiając przeżywalność komórek. Właściwości te sprawiają, że 661W jest solidnym modelem do analizy szlaków molekularnych leżących u podstaw degeneracji fotoreceptorów. Należy zauważyć, że linia 661W była również powiązana z historycznymi przypadkami błędnej identyfikacji linii komórkowych, w tym z zanieczyszczeniem krzyżowym linią RGC-5, co podkreśla konieczność rygorystycznej autentyfikacji przy stosowaniu tego modelu. Podsumowując, 661W stanowi dobrze scharakteryzowaną mysią platformę fotoreceptorów czopkowych do badania zwyrodnienia siatkówki, reakcji na stres oksydacyjny, funkcji rzęsek i interwencji terapeutycznych ukierunkowanych na przeżywalność czopków.

37°C, 5%_CO2, nawilżona atmosfera.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

W Cytion gwarantujemy jakość i żywotność naszych produktów. Gwarantujemy, że nasze komórki będą żywotne na początku hodowli przez 60 dni po wysyłce z naszych zakładów. Zapewniamy, że wszystkie materiały są zgodne ze specyfikacjami opisanymi w certyfikacie analizy i/lub karcie produktu

Szczegółowe informacje można znaleźć w naszej <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Oświadczeniu gwarancyjnym