661W

A 661W é uma linhagem celular derivada de fotorreceptores de cone murinos, originalmente estabelecida a partir de um tumor retiniano surgido em um camundongo transgênico que expressa o antígeno T grande do vírus simiano 40 (SV40) sob o controle do promotor da proteína de ligação a retinóides interfotoreceptora humana (IRBP). A linhagem foi gerada a partir de explantes retinianos pós-natais e representa precursores imortalizados de fotorreceptores de cones. As células 661W apresentam crescimento aderente e são rotineiramente mantidas em meio Eagle modificado por Dulbecco, suplementado com soro fetal bovino, sob condições padrão de cultura. Elas têm sido amplamente utilizadas como modelo in vitro de fotorreceptores de cones, particularmente em estudos de danos induzidos pela luz, estresse oxidativo, apoptose e mecanismos de degeneração retiniana.

A caracterização molecular e transcriptômica confirma que as células 661W expressam a maioria dos marcadores de fotorreceptores de cones, incluindo opsinas de cones e genes associados à fototransdução. Estudos de imagem de alta resolução demonstram que essas células formam cílios primários com características estruturais que lembram os cílios de conexão dos fotorreceptores e os segmentos externos. Análises imunocitoquímicas e ultraestruturais revelam a localização de proteínas ciliares no axonema, na membrana e na zona de transição, corroborando sua utilidade na investigação de ciliopatias retinianas. Estudos funcionais demonstraram que a supressão mediada por siRNA de genes de transporte intraflagelar, como o Ift88, leva à perda de cílios, validando as células 661W como um sistema viável para estudos mecanísticos da biologia ciliar.

As células 661W são altamente sensíveis ao estresse fotooxidativo. A exposição à luz visível induz a morte celular por apoptose associada à regulação negativa da atividade do NF-κB e à ativação das vias das caspasas. A superexpressão de proteínas antiapoptóticas, como a Bcl-2, confere resistência à apoptose induzida pela luz, mantendo a atividade nuclear do NF-κB e melhorando a sobrevivência celular. Essas propriedades tornam a 661W um modelo robusto para a análise das vias moleculares subjacentes à degeneração dos fotorreceptores. É importante observar que a linhagem 661W também esteve envolvida em casos históricos de identificação incorreta de linhagens celulares, incluindo contaminação cruzada com a linhagem RGC-5, o que ressalta a necessidade de autenticação rigorosa ao empregar esse modelo. Em conjunto, a 661W oferece uma plataforma murina de fotorreceptores de cones bem caracterizada para o estudo da degeneração retiniana, das respostas ao estresse oxidativo, da função ciliar e de intervenções terapêuticas voltadas para a sobrevivência dos cones.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.