TC-1

La lignée cellulaire TC-1 est une lignée de cellules épithéliales pulmonaires murines transformées par les oncogènes E6 et E7 du papillomavirus humain de type 16 (HPV16), ainsi que par un oncogène H-ras activé. Cette lignée cellulaire a été développée à partir de cellules épithéliales pulmonaires primaires de souris C57BL/6 à l’aide d’une stratégie de transduction rétrovirale double. Au départ, un vecteur rétroviral dérivé du virus de la leucémie murine de Moloney (MoMLV), tel que le pLXSN-16E6E7, a été utilisé pour introduire les oncogènes E6 et E7. Dans ce vecteur, les gènes sont exprimés à partir du promoteur viral 5′ LTR, et un gène de résistance à la néomycine (Neo^R), sous le contrôle d’un promoteur SV40 interne, a permis la sélection au moyen de G418. L’expression stable des gènes E6 et E7 entraîne l’inactivation des voies des suppresseurs de tumeurs p53 et Rb, ce qui conduit à l’immortalisation cellulaire.

Après la sélection initiale, un deuxième vecteur rétroviral à base de MoMLV codant pour un gène H-ras activé (G12V) a été introduit pour parachever la transformation. Ce vecteur portait un marqueur de sélection différent, généralement un gène de résistance à l’hygromycine (hph), sous le contrôle d’un promoteur interne tel que SV40 ou PGK. Les cellules ayant survécu à une sélection séquentielle au G418 et à l’hygromycine ont démontré une intégration stable des trois oncogènes, ce qui a donné lieu à des cellules TC-1 entièrement transformées et immortalisées.

Dans les études fonctionnelles, les cellules TC-1 présentent une forte expression des molécules du CMH de classe I, ce qui les rend hautement immunogènes et largement utilisées pour l’évaluation de vaccins expérimentaux et d’immunothérapies ciblant les tumeurs malignes associées au VPH. Elles ont joué un rôle déterminant dans les études précliniques sur les vaccins, en particulier celles visant à induire des réponses des lymphocytes T CD8⁺ contre la protéine E7 du VPH16. De plus, des sous-lignées présentant une expression réduite du CMH de classe I ont été développées afin de reproduire les mécanismes d’échappement immunitaire, ce qui permet de mieux comprendre l’interaction entre les cellules tumorales et l’immunité de l’hôte. Ces propriétés font de la lignée TC-1 un modèle robuste et polyvalent pour l’immuno-oncologie et le développement de vaccins contre le VPH.

37 °C, 5 % _de CO_₂, atmosphère humidifiée.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes par luminescence.

Afin de s’assurer qu’il n’y a aucune contamination bactérienne, fongique ou par des levures, les cultures cellulaires font l’objet d’inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placez les flacons dans de l’azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre environ −150 et −196 °C. L’entreposage à −80 °C n’est acceptable qu’à titre d’étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l’azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées dans de la glace sèche, dans un emballage isotherme validé contenant suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d’environ −78 °C pendant tout le transport. À la réception, inspectez immédiatement le conteneur et transférez sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous garantissons la qualité et la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours à compter de leur expédition depuis nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d’analyse et/ou la fiche technique du produit.

Pour plus de détails, veuillez consulter notre déclaration de garantie.