TC-1

TC-1 to mysia linia komórek nabłonkowych płuc transformowana onkogenami E6 i E7 wirusa brodawczaka ludzkiego typu 16 (HPV16) wraz z aktywowanym onkogenem H-ras. Linia komórkowa została opracowana z pierwotnych komórek nabłonkowych płuc myszy C57BL/6 przy użyciu podwójnej strategii transdukcji retrowirusowej. Początkowo do dostarczenia onkogenów E6 i E7 wykorzystano wektor retrowirusowy pochodzący z mysiego wirusa białaczki Moloney (MoMLV), taki jak pLXSN-16E6E7. W tym wektorze geny są ekspresjonowane z wirusowego promotora 5′ LTR, a gen oporności na neomycynę (Neo^R) pod kontrolą wewnętrznego promotora SV40 umożliwił selekcję za pomocą G418. Stabilna ekspresja E6 i E7 powoduje inaktywację szlaków supresorowych nowotworów p53 i Rb, prowadząc do unieśmiertelnienia komórek.

Po wstępnej selekcji wprowadzono drugi wektor retrowirusowy oparty na MoMLV, kodujący aktywowany gen H-ras (G12V), aby zakończyć transformację. Wektor ten niósł inny marker selekcyjny, zazwyczaj gen oporności na higromycynę (hph), sterowany przez wewnętrzny promotor, taki jak SV40 lub PGK. Komórki, które przetrwały sekwencyjną selekcję za pomocą G418 i higromycyny, wykazały stabilną integrację wszystkich trzech onkogenów, co doprowadziło do pełnej transformacji i unieśmiertelnienia komórek TC-1.

W badaniach funkcjonalnych komórki TC-1 wykazują silną ekspresję cząsteczek MHC klasy I, co czyni je wysoce immunogennymi i szeroko wykorzystywanymi do oceny eksperymentalnych szczepionek i immunoterapii ukierunkowanych na nowotwory związane z HPV. Odegrały one kluczową rolę w przedklinicznych badaniach szczepionek, szczególnie tych mających na celu wywołanie odpowiedzi komórek T CD8⁺ przeciwko HPV16 E7. Dodatkowo opracowano podlinie z obniżoną ekspresją MHC klasy I w celu naśladowania mechanizmów ucieczki immunologicznej, co zapewnia dalszy wgląd w interakcje między komórkami nowotworowymi a odpornością gospodarza. Te właściwości sprawiają, że TC-1 jest solidnym i wszechstronnym modelem dla immunoonkologii i rozwoju szczepionek przeciwko HPV.

37°C, 5%_CO2, nawilżona atmosfera.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

W Cytion gwarantujemy jakość i żywotność naszych produktów. Gwarantujemy, że nasze komórki będą żywotne na początku hodowli przez 60 dni po wysyłce z naszych zakładów. Zapewniamy, że wszystkie materiały są zgodne ze specyfikacjami opisanymi w certyfikacie analizy i/lub karcie produktu

Szczegółowe informacje można znaleźć w naszej <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Oświadczeniu gwarancyjnym