TC-1

TC-1 on hiire kopsu epiteelirakkude liin, mis on transformeeritud inimese papilloomiviiruse tüübi 16 (HPV16) E6 ja E7 onkogeenidega koos aktiveeritud H-ras onkogeeniga. Rakuliin arendati C57BL/6 hiirte primaarse kopsu epiteelirakkudest, kasutades kahe retroviiruse transduktsiooni strateegiat. Esialgu kasutati E6 ja E7 onkogeenide edastamiseks Moloney hiire leukeemia viirusest (MoMLV) saadud retroviiruse vektorit, näiteks pLXSN-16E6E7. Selles vektoris ekspresseeruvad geenid viiruslikust 5′ LTR promootorist ja neomütsiiniresistentsuse geen (Neo^R) sisemise SV40 promootori kontrolli all võimaldas valikut G418-ga. E6 ja E7 stabiilne ekspressioon põhjustab p53 ja Rb tuumori supressorite rajalte inaktiveerimise, mis viib rakkude immortaliseerumiseni.

Esialgse selektsiooni järel viidi sisse teine MoMLV-põhine retroviirusvektor, mis kodeerib aktiveeritud H-ras (G12V) geeni, et viia lõpule transformatsioon. See vektor kandis erinevat valitavat markeri, tavaliselt hügromütsiiniresistentsuse geeni (hph), mida juhtis sisemine promootor, nagu SV40 või PGK. Rakud, mis jäid ellu järjestikuse valiku järel G418 ja hügromütsiiniga, näitasid kõigi kolme onkogeeni stabiilset integratsiooni, mille tulemuseks olid täielikult transformatsioonilised ja surematud TC-1 rakud.

Funktsionaalsetes uuringutes näitavad TC-1 rakud tugevat MHC I klassi molekulide ekspressiooni, mis muudab need väga immunogeenseks ja laialdaselt kasutatavaks HPV-ga seotud pahaloomuliste kasvajate eksperimentaalsete vaktsiinide ja immunoteraapiate hindamisel. Need on olnud olulised prekliinilistes vaktsiiniuuringutes, eriti nendes, mille eesmärk on esile kutsuda CD8⁺ T-rakkude vastus HPV16 E7-le. Lisaks on välja töötatud alamliinid, millel on MHC klass I ekspressioon alla reguleeritud, et jäljendada immuunpõgenemise mehhanisme, pakkudes täiendavaid teadmisi kasvajarakkude ja peremeesorganismi immuunsuse vastastikmõju kohta. Need omadused muudavad TC-1 tugevaks ja mitmekülgseks mudeliks immuunonkoloogias ja HPV vaktsiini arendamisel.

37°C, 5%_CO2, niisutatud atmosfäär.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

Cytion seisab oma toodete kvaliteedi ja elujõulisuse eest. Me garanteerime, et meie rakud on elujõulised kasvatamise alguses 60 päeva jooksul pärast meie rajatistest saatmist. Tagame, et kõik materjalid vastavad analüüsisertifikaadis ja/või tootelehel kirjeldatud spetsifikatsioonidele

Täielikke üksikasju leiate meie <a href="""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Tagatise avaldusest