TC-1

TC-1 é uma linha celular epitelial pulmonar murina transformada com os oncogenes E6 e E7 do papilomavírus humano tipo 16 (HPV16), juntamente com um oncogene H-ras ativado. A linha celular foi desenvolvida a partir de células epiteliais pulmonares primárias de ratos C57BL/6 utilizando uma estratégia de transdução retroviral dupla. Inicialmente, um vetor retroviral derivado do vírus da leucemia murina de Moloney (MoMLV), tal como o pLXSN-16E6E7, foi utilizado para administrar os oncogenes E6 e E7. Neste vetor, os genes são expressos a partir do promotor viral 5′ LTR, e um gene de resistência à neomicina (Neo^R) sob o controlo de um promotor SV40 interno permitiu a seleção com G418. A expressão estável de E6 e E7 resulta na inativação das vias supressoras de tumor p53 e Rb, levando à imortalização celular.

Após a seleção inicial, um segundo vetor retroviral baseado em MoMLV que codifica um gene H-ras (G12V) ativado foi introduzido para completar a transformação. Este vetor transportava um marcador selecionável diferente, tipicamente um gene de resistência à higromicina (hph), impulsionado por um promotor interno, como SV40 ou PGK. As células que sobreviveram à seleção sequencial com G418 e higromicina demonstraram integração estável de todos os três oncogenes, resultando em células TC-1 totalmente transformadas e imortalizadas.

Em estudos funcionais, as células TC-1 exibem forte expressão de moléculas MHC classe I, tornando-as altamente imunogénicas e amplamente utilizadas para avaliar vacinas experimentais e imunoterapias direcionadas a neoplasias associadas ao HPV. Elas têm sido fundamentais em estudos pré-clínicos de vacinas, particularmente aqueles destinados a provocar respostas de células T CD8⁺ contra o HPV16 E7. Além disso, foram desenvolvidas sublinhagens com expressão regulada negativamente de MHC classe I para imitar mecanismos de fuga imunológica, proporcionando mais insights sobre a interação entre células tumorais e imunidade do hospedeiro. Essas propriedades tornam o TC-1 um modelo robusto e versátil para imuno-oncologia e desenvolvimento de vacinas contra o HPV.

37°C, 5%_CO2, atmosfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

Na Cytion, nós garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células serão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou Folha de Produto

Para mais informações, consulte a nossa <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Declaração de Garantia