TC-1

TC-1は、ヒトパピローマウイルス16型（HPV16）のE6およびE7発癌遺伝子ならびに活性化H-ras発癌遺伝子を導入したマウス肺上皮細胞株である。 この細胞株は、二重レトロウイルス導入法を用いてC57BL/6マウスの初代肺上皮細胞から樹立された。最初に、pLXSN-16E6E7などのモローニーマウス白血病ウイルス（MoMLV）由来レトロウイルスベクターを用いてE6およびE7癌遺伝子を導入した。 このベクターでは、遺伝子はウイルスの5′ LTRプロモーターから発現し、内部SV40プロモーター制御下のネオマイシン耐性遺伝子（Neo^R）によりG418による選択が可能となった。E6およびE7の安定発現は、p53およびRb腫瘍抑制経路の不活性化をもたらし、細胞の不死化を促進する。

初期選択後、活性化H-ras（G12V）遺伝子をコードする第二のMoMLVベースのレトロウイルスベクターを導入し、形質転換を完了させた。 このベクターは異なる選択マーカー（通常はSV40やPGKなどの内部プロモーターで制御されるヒグロマイシン耐性遺伝子（hph））を保持していた。G418とヒグロマイシンによる連続選択を生き延びた細胞は、3つの癌遺伝子全てが安定的に組み込まれており、完全な形質転換と不死化が達成されたTC-1細胞となった。

機能研究において、TC-1細胞はMHCクラスI分子の強い発現を示し、高い免疫原性を有するため、HPV関連悪性腫瘍を標的とする実験的ワクチンや免疫療法の評価に広く利用されている。特にHPV16 E7に対するCD8⁺ T細胞応答の誘導を目的とした前臨床ワクチン研究において重要な役割を果たしてきた。 さらに、免疫逃避機構を模倣するためMHCクラスI発現をダウンレギュレートしたサブラインが開発され、腫瘍細胞と宿主免疫の相互作用に関するさらなる知見を提供している。これらの特性により、TC-1細胞は免疫腫瘍学およびHPVワクチン開発における堅牢かつ汎用性の高いモデルとなっている。

37℃、5%_CO2、加湿雰囲気。

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

マイコプラズマ汚染は、PCRベースのアッセイと発光ベースのマイコプラズマ検出法の両方を用いて除外される。

細菌、真菌、酵母のコンタミネーションがないことを確認するため、細胞培養物は毎日目視検査が行われる。

長期保存の場合、バイアルを-150～-196℃の気相液体窒素に入れる。80℃での保存は、液体窒素に移す前の短い暫定措置としてのみ許容される。

凍結保存された細胞株は、輸送中約-78℃を維持するのに十分な保冷剤とともに、有効な断熱包装でドライアイスとともに輸送される。受領後、直ちに容器を検査し、遅滞なくバイアルを適切な保管場所に移してください。

サイシオンは、製品の品質と生存率を保証します。 当社では、培養を開始した時点で、当社施設からの出荷後60日間、細胞が生存可能であることを保証しています。 すべての材料が、分析証明書および／または製品シートに記載された仕様に適合していることを保証します。

詳細については、<a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Warranty Statement をご参照ください。