TC-1

TC-1 เป็นสายพันธุ์เซลล์เยื่อบุผิวปอดของหนูที่ถูกเปลี่ยนแปลงด้วยยีนก่อมะเร็ง E6 และ E7 ของเชื้อไวรัสฮิวแมนแพปิลโลมาไวรัสชนิดที่ 16 (HPV16) พร้อมกับยีนก่อมะเร็ง H-ras ที่ถูกกระตุ้น เซลล์ไลน์นี้ถูกพัฒนาขึ้นจากเซลล์เยื่อบุผิวปอดปฐมภูมิของหนู C57BL/6 โดยใช้กลยุทธ์การถ่ายโอนยีนแบบย้อนกลับสองครั้ง ในขั้นต้น ใช้เวกเตอร์ย้อนกลับที่ได้จากไวรัสลูคีเมียของหนู Moloney (MoMLV) เช่น pLXSN-16E6E7 เพื่อส่งยีนก่อมะเร็ง E6 และ E7 ในเวกเตอร์นี้ ยีนถูกแสดงออกจากโปรโมเตอร์ 5′ LTR ของไวรัส และยีนต้านทานนีโอมัยซิน (Neo^R) ภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์ภายใน SV40 ช่วยให้สามารถคัดเลือกด้วย G418 ได้ การแสดงออกที่คงที่ของ E6 และ E7 ส่งผลให้เกิดการยับยั้งการทำงานของเส้นทางยับยั้งเนื้องอก p53 และ Rb ซึ่งนำไปสู่การทำให้เซลล์เป็นอมตะ

หลังจากการคัดเลือกเบื้องต้นแล้ว ได้มีการนำเวกเตอร์ไวรัสย้อนกลับที่ใช้ MoMLV เป็นฐานซึ่งเข้ารหัสยีน H-ras (G12V) ที่ถูกกระตุ้น มาใช้เพิ่มเติมเพื่อดำเนินการเปลี่ยนแปลงพันธุกรรมให้สมบูรณ์ เวกเตอร์นี้พกพาเครื่องหมายเลือกชนิดอื่น ซึ่งโดยทั่วไปคือยีนต้านทานไฮโกรไมซิน (hph) ที่ถูกควบคุมโดยโปรโมเตอร์ภายใน เช่น SV40 หรือ PGK เซลล์ที่รอดจากการคัดเลือกด้วย G418 และไฮโกรไมซินตามลำดับ แสดงให้เห็นถึงการรวมตัวที่คงที่ของยีนก่อมะเร็งทั้งสาม ส่งผลให้เกิดเซลล์ TC-1 ที่เปลี่ยนแปลงสมบูรณ์และมีชีวิตอมตะ

ในการศึกษาเชิงหน้าที่ เซลล์ TC-1 แสดงการแสดงออกของโมเลกุล MHC class I อย่างเข้มข้น ทำให้มีคุณสมบัติเป็นแอนติเจนสูงและถูกนำมาใช้อย่างแพร่หลายในการประเมินวัคซีนทดลองและภูมิคุ้มกันบำบัดที่มุ่งเป้าต่อมะเร็งที่เกี่ยวข้องกับ HPV เซลล์เหล่านี้มีบทบาทสำคัญในการศึกษาวัคซีนก่อนการทดลอง โดยเฉพาะอย่างยิ่งในการกระตุ้นการตอบสนองของเซลล์ T ชนิด CD8⁺ ต่อ HPV16 E7 นอกจากนี้ ยังได้มีการพัฒนาสายพันธุ์ย่อยที่มีการแสดงออกของ MHC class I ลดลง เพื่อเลียนแบบกลไกการหลบหนีภูมิคุ้มกัน ซึ่งช่วยให้เข้าใจความสัมพันธ์ระหว่างเซลล์มะเร็งกับภูมิคุ้มกันของโฮสต์ได้ลึกซึ้งยิ่งขึ้น คุณสมบัติเหล่านี้ทำให้ TC-1 เป็นแบบจำลองที่มีความแข็งแกร่งและหลากหลายสำหรับการวิจัยด้านภูมิคุ้มกันบำบัดมะเร็งและการพัฒนาวัคซีน HPV

37°C, 5%_CO2, บรรยากาศชื้น

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

การปนเปื้อนของไมโคพลาสมาถูกตัดออกโดยใช้ทั้งการทดสอบแบบ PCR และการตรวจหาไมโคพลาสมาโดยใช้วิธีการเรืองแสง

เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีการปนเปื้อนของแบคทีเรีย เชื้อรา หรือยีสต์ การเพาะเลี้ยงเซลล์จะถูกตรวจสอบด้วยสายตาทุกวัน

สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ให้วางหลอดบรรจุในไนโตรเจนเหลวในสถานะไอที่อุณหภูมิประมาณ −150 ถึง −196 °C การเก็บรักษาที่อุณหภูมิ −80 °C สามารถใช้ได้เฉพาะในระยะสั้นก่อนการย้ายไปยังไนโตรเจนเหลวเท่านั้น

เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า

ที่Cytion เรามุ่งมั่นในคุณภาพและความมีชีวิตของผลิตภัณฑ์ของเรา เรารับประกันว่าเซลล์ของเราจะยังมีชีวิตอยู่เมื่อเริ่มการเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 60 วันหลังจากจัดส่งจากโรงงานของเรา เรารับรองว่าวัสดุทั้งหมดเป็นไปตามข้อกำหนดที่ระบุไว้ใน ใบรับรองการวิเคราะห์ และ/หรือแผ่นข้อมูลผลิตภัณฑ์

สำหรับรายละเอียดเพิ่มเติม กรุณาดูที่ <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">นโยบายการรับประกัน.