TC-1

TC-1 je myšia pľúcna epitelová bunka transformovaná onkogénmi E6 a E7 ľudského papilomavírusu typu 16 (HPV16) spolu s aktivovaným onkogénom H-ras. Bunka bola vyvinutá z primárnych pľúcnych epitelových buniek myší C57BL/6 pomocou dvojitej retrovirálnej transdukčnej stratégie. Spočiatku sa na dodanie onkogénov E6 a E7 použil retrovirálny vektor odvodený z Moloneyho myšieho leukemického vírusu (MoMLV), napríklad pLXSN-16E6E7. V tomto vektore sa gény exprimujú z vírusového 5′ LTR promotora a gén rezistencie na neomycín (Neo^R) pod kontrolou interného SV40 promotora umožnil selekciu s G418. Stabilná expresia E6 a E7 vedie k inaktivácii tumor supresorových dráh p53 a Rb, čo vedie k imortalizácii buniek.

Po počiatočnej selekcii bol na dokončenie transformácie zavedený druhý retrovirový vektor na báze MoMLV kódujúci aktivovaný gén H-ras (G12V). Tento vektor niesol iný selektovateľný marker, typicky gén rezistencie na hygromycín (hph), riadený interným promotérom, ako je SV40 alebo PGK. Bunky, ktoré prežili postupnú selekciu s G418 a hygromycínom, preukázali stabilnú integráciu všetkých troch onkogénov, čo viedlo k úplnej transformácii a imortalizácii buniek TC-1.

Vo funkčných štúdiách vykazujú bunky TC-1 silnú expresiu molekúl MHC triedy I, vďaka čomu sú vysoko imunogénne a široko využívané na hodnotenie experimentálnych vakcín a imunoterapií zameraných na malignity asociované s HPV. Zohrávajú kľúčovú úlohu v predklinických štúdiách vakcín, najmä v tých, ktoré sú zamerané na vyvolanie odpovede CD8⁺ T-buniek proti HPV16 E7. Okrem toho boli vyvinuté sublínie s downregulovanou expresiou MHC triedy I, ktoré napodobňujú mechanizmy imunitného úniku, čím poskytujú ďalšie poznatky o vzájomnom pôsobení medzi nádorovými bunkami a imunitou hostiteľa. Tieto vlastnosti robia z TC-1 robustný a univerzálny model pre imunoonkológiu a vývoj vakcín proti HPV.

37 °C, 5 %_CO2, zvlhčená atmosféra.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminácia mykoplazmami sa vylučuje pomocou testov založených na PCR a metód detekcie mykoplaziem založených na luminiscencii.

Aby sa zabezpečilo, že nedošlo ku kontaminácii baktériami, hubami alebo kvasinkami, bunkové kultúry sa denne vizuálne kontrolujú.

Na dlhodobé uchovávanie umiestnite injekčné liekovky do kvapalnej fázy dusíka v pare pri teplote približne -150 až -196 °C. Skladovanie pri teplote -80 °C je prijateľné len ako krátky prechodný krok pred presunom do tekutého dusíka.

Kryokonzervované bunkové línie sa prepravujú na suchom ľade v overených, izolovaných obaloch s dostatočným množstvom chladiva na udržanie teploty približne -78 °C počas celej prepravy. Po prijatí ihneď skontrolujte obal a bezodkladne premiestnite injekčné liekovky do vhodného skladu.

V spoločnosti Cytion si stojíme za kvalitou a životaschopnosťou našich produktov. Garantujeme, že naše bunky budú životaschopné na začiatku kultivácie počas 60 dní po odoslaní z našich zariadení. Zaručujeme, že všetky materiály zodpovedajú špecifikáciám opísaným v certifikáte analýzy a/alebo v produktovom liste

Úplné informácie nájdete v našom <a href=""/Kto sme/záruka/"" hreflang=""x-default"">Vyhlásení o záruke