TC-1

TC-1 — це лінія епітеліальних клітин легенів мишей, трансформована онкогенами E6 і E7 вірусу папіломи людини типу 16 (HPV16) разом з активованим онкогеном H-ras. Лінія клітин була розроблена з первинних епітеліальних клітин легенів мишей C57BL/6 за допомогою подвійної ретровірусної трансдукційної стратегії. Спочатку для доставки онкогенів E6 і E7 використовувався ретровірусний вектор, отриманий з мишачого лейкемічного вірусу Молоні (MoMLV), такий як pLXSN-16E6E7. У цьому векторі гени експресуються з вірусного промотора 5′ LTR, а ген резистентності до неоміцину (Neo^R) під контролем внутрішнього промотора SV40 дозволив провести селекцію за допомогою G418. Стабільна експресія E6 та E7 призводить до інактивації шляхів супресорів пухлин p53 та Rb, що сприяє безсмертності клітин.

Після початкового відбору для завершення трансформації було введено другий ретровірусний вектор на основі MoMLV, що кодує активований ген H-ras (G12V). Цей вектор ніс інший селективний маркер, зазвичай ген резистентності до гігроміцину (hph), керований внутрішнім промотором, таким як SV40 або PGK. Клітини, які вижили після послідовного відбору за допомогою G418 і гігроміцину, продемонстрували стабільну інтеграцію всіх трьох онкогенів, що призвело до повної трансформації та імунізації клітин TC-1.

У функціональних дослідженнях клітини TC-1 демонструють сильну експресію молекул MHC класу I, що робить їх високоімуногенними і широко використовуваними для оцінки експериментальних вакцин та імунотерапій, спрямованих на злоякісні новоутворення, пов'язані з ВПЛ. Вони відіграли важливу роль у доклінічних дослідженнях вакцин, зокрема тих, що були спрямовані на викликання реакції CD8⁺ Т-клітин проти ВПЛ16 E7. Крім того, були розроблені сублінії з пониженою експресією MHC класу I для імітації механізмів імунного уникнення, що дало додаткові уявлення про взаємодію між пухлинними клітинами та імунітетом хазяїна. Ці властивості роблять TC-1 надійною та універсальною моделлю для імуноонкології та розробки вакцин проти ВПЛ.

37°C, 5% _CO2, волога атмосфера.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Зараження мікоплазмою виключається за допомогою аналізів на основі ПЛР та люмінесцентних методів виявлення мікоплазми.

Щоб переконатися у відсутності бактеріального, грибкового або дріжджового забруднення, клітинні культури піддаються щоденному візуальному контролю.

Для тривалого зберігання помістіть флакони в парофазний рідкий азот при температурі від -150 до -196 °C. Зберігання при -80 °C допустиме лише як короткий проміжний етап перед перенесенням у рідкий азот.

Кріоконсервовані клітинні лінії транспортуються на сухому льоду в перевіреній ізольованій упаковці з достатньою кількістю холодоагенту для підтримання температури приблизно -78 °C під час транспортування. При отриманні негайно огляньте контейнер і без зволікань перемістіть флакони у відповідне місце зберігання.

У Cytion ми відповідаємо за якість та життєздатність нашої продукції. Ми гарантуємо, що наші клітини будуть життєздатними на початку культивування протягом 60 днів після відвантаження з нашого заводу. Ми запевняємо, що всі матеріали відповідають специфікаціям, описаним у сертифікаті аналізу та/або паспорті продукту

Для отримання більш детальної інформації, будь ласка, зверніться до нашого <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Заяви про гарантію</a>