TC-1

TC-1 е миши епителна клетъчна линия, трансформирана с онкогени E6 и E7 на човешки папиломавирус тип 16 (HPV16), заедно с активиран онкоген H-ras. Клетъчната линия е разработена от първични епителни клетки от белия дроб на мишки C57BL/6, като е използвана двойна ретровирусна трансдукционна стратегия. Първоначално за доставянето на онкогените E6 и E7 е използван ретровирусен вектор, получен от мишия левкемичен вирус Moloney (MoMLV), като pLXSN-16E6E7. В този вектор гените се експресират от вирусния 5′ LTR промотор, а генът за резистентност към неомицин (Neo^R) под контрола на вътрешен SV40 промотор позволява селекция с G418. Стабилната експресия на E6 и E7 води до инактивиране на тумор-супресорните пътища p53 и Rb, което води до иммортализация на клетките.

След първоначалната селекция, за да се завърши трансформацията, беше въведен втори ретровирусен вектор на базата на MoMLV, кодиращ активиран H-ras (G12V) ген. Този вектор носи различен селекционен маркер, обикновено ген за резистентност към хигромицин (hph), управляван от вътрешен промотор като SV40 или PGK. Клетките, които оцеляват след последователна селекция с G418 и хигромицин, демонстрират стабилна интеграция на всички три онкогена, което води до напълно трансформирани и безсмъртни TC-1 клетки.

В функционални проучвания TC-1 клетките проявяват силна експресия на MHC клас I молекули, което ги прави силно имуногенни и широко използвани за оценка на експериментални ваксини и имунотерапии, насочени към злокачествени заболявания, свързани с HPV. Те са били от съществено значение в предклинични проучвания на ваксини, особено тези, насочени към предизвикване на CD8⁺ Т-клетъчни реакции срещу HPV16 E7. Освен това са разработени подлинии с понижена експресия на MHC клас I, за да се имитират механизмите на имунно избягване, което предоставя допълнителна информация за взаимодействието между туморните клетки и имунитета на гостоприемника. Тези свойства правят TC-1 стабилен и гъвкав модел за имуноонкология и разработване на ваксини срещу HPV.

37°C, 5%_CO2, овлажнена атмосфера.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Замърсяването с микоплазма се изключва както чрез PCR-базирани анализи, така и чрез луминесцентни методи за откриване на микоплазма.

За да се гарантира, че няма бактериално, гъбично или дрождево замърсяване, клетъчните култури се подлагат на ежедневни визуални проверки.

За дълготрайно съхранение поставете флаконите в течен азот в парна фаза при температура около -150 до -196 °C. Съхранението при -80 °C е приемливо само като кратък междинен етап преди прехвърлянето в течен азот.

Криоконсервираните клетъчни линии се транспортират върху сух лед в утвърдени, изолирани опаковки с достатъчно хладилен агент, за да се поддържа приблизително -78 °C по време на транспортирането. При получаването незабавно прегледайте опаковката и незабавно прехвърлете флаконите за подходящо съхранение.

Ние в Cytion заставаме зад качеството и жизнеспособността на нашите продукти. Гарантираме, че нашите клетки ще бъдат жизнеспособни в началото на култивирането в продължение на 60 дни след изпращането им от нашите съоръжения. Гарантираме, че всички материали отговарят на спецификациите, описани в сертификата за анализ и/или продуктовата листа

За пълни подробности, моля, направете справка с нашата <a href=""/Кои сме ние/Гаранция/"" hreflang=""x-default"">Гаранционна декларация